| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 0 前言 | 第13-29页 |
| 0.1 RNA 适体 | 第13-20页 |
| 0.1.1 RNA 适体的产生及特点 | 第13-15页 |
| 0.1.2 RNA 适体与配体的相互作用 | 第15-16页 |
| 0.1.3 RNA 适体与抗体的比较 | 第16-17页 |
| 0.1.4 RNA 适体在医药学领域的研究现状 | 第17-19页 |
| 0.1.5 RNA 适体的局限性及解决策略 | 第19-20页 |
| 0.2 原核生物中的非编码小 RNA | 第20-26页 |
| 0.2.1 原核分编码小 RNA 根据功能的分类 | 第21-25页 |
| 0.2.2 分子伴侣 Hfq 的作用 | 第25页 |
| 0.2.3 sRNA 功能的研究方法 | 第25-26页 |
| 0.2.4 sRNA 的研究前景 | 第26页 |
| 0.3 大肠杆菌中精氨酸的代谢途径 | 第26-29页 |
| 1 体外筛选特异性结合精氨酸的 RNA 适体 | 第29-52页 |
| 1.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 1.1.1 体外合成核酸文库 | 第29页 |
| 1.1.2 菌株和质粒 | 第29-30页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.1.4 培养基和溶液 | 第31-32页 |
| 1.2 实验仪器 | 第32-33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-40页 |
| 1.3.1 体外构建单链 DNA 核酸文库 | 第33页 |
| 1.3.2 DNA 核酸文库的体外扩增及条件优化 | 第33-35页 |
| 1.3.3 RNA 文库的体外构建 | 第35-36页 |
| 1.3.4 核酸纯化方案 | 第36-37页 |
| 1.3.5 RNA 文库筛选结合精氨酸序列实验方案 | 第37-38页 |
| 1.3.6 次一级核酸文库的获得 | 第38页 |
| 1.3.7 连接转化测序鉴定实验方案 | 第38-40页 |
| 1.3.8 ITC 检测相互作用 | 第40页 |
| 1.4 实验结果 | 第40-51页 |
| 1.4.1 双链 DNA 文库的获得 | 第40-41页 |
| 1.4.2 单链 RNA 文库的获得 | 第41-42页 |
| 1.4.3 次级文库的扩增 | 第42-44页 |
| 1.4.4 筛选过程中阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| 1.4.5 筛选结果鉴定分析 | 第45-46页 |
| 1.4.6 RNA 序列结果分析 | 第46-49页 |
| 1.4.7 独立结合实验证明上述两个 RNA 分子的结合能力 | 第49-50页 |
| 1.4.8 ITC 检测 22-7 与游离精氨酸的结合力 | 第50-51页 |
| 1.5 小结与讨论 | 第51-52页 |
| 2 RNA 适体 22-7 过表达体系的构建及其生物活性评价 | 第52-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-54页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第52-53页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第53-54页 |
| 2.2 实验仪器 | 第54页 |
| 2.3 实验方法 | 第54-61页 |
| 2.3.1 体外合成 22-7 序列 | 第54-55页 |
| 2.3.2 碱裂解法提取质粒 | 第55-56页 |
| 2.3.3 双酶切目的片段 | 第56页 |
| 2.3.4 胶回收目的片段 | 第56-57页 |
| 2.3.5 定点突变 pBAD/gIII B 载体实验方案 | 第57-58页 |
| 2.3.6 定点突变产物阳性克隆鉴定 | 第58页 |
| 2.3.7 双切 pBAD 载体序列 | 第58页 |
| 2.3.8 目的片段与载体连接 | 第58-59页 |
| 2.3.9 细菌总 RNA 提取 | 第59页 |
| 2.3.10 反转录 PCR | 第59-60页 |
| 2.3.11 实时荧光定量 PCR | 第60-61页 |
| 2.4 实验结果 | 第61-69页 |
| 2.4.1 22-7 序列 BLAST 序列分析 | 第61页 |
| 2.4.2 PUC 57 质粒提取 | 第61-62页 |
| 2.4.3 PUC 57 质粒双酶切电泳结果 | 第62页 |
| 2.4.4 pBAD 质粒定点突变电泳结果 | 第62-63页 |
| 2.4.5 pBAD 双切胶回收电泳结果 | 第63页 |
| 2.4.6 pBAD 连接目的片段阳性克隆的鉴定 | 第63-64页 |
| 2.4.7 诱导表达 22-7 对细菌生长的影响 | 第64页 |
| 2.4.8 细菌总 RNA 提取电泳结果 | 第64-65页 |
| 2.4.9 过表达体系检测 22-7 表达水平 | 第65-66页 |
| 2.4.10 荧光定量检测基因表达水平 | 第66-69页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第69-71页 |
| 3 非编码小 RNA 结合代谢小分子功能的探索 | 第71-82页 |
| 3.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第71页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 3.2 实验器材 | 第72页 |
| 3.3 实验方法 | 第72-75页 |
| 3.3.1 pBAD 定点突变后双酶切 | 第72页 |
| 3.3.2 大肠杆菌基因组提取 | 第72-73页 |
| 3.3.3 sgrS 基因克隆 | 第73-74页 |
| 3.3.4 目的基因片段与 T 载体连接，测序鉴定 | 第74页 |
| 3.3.5 sgrS 连接 T 载体双酶切鉴定回收 | 第74页 |
| 3.3.6 目的片段 sgrS 连接载体 pBAD | 第74-75页 |
| 3.4 实验结果 | 第75-81页 |
| 3.4.1 基因组提取 | 第75页 |
| 3.4.2 sgrS 基因克隆 | 第75页 |
| 3.4.3 pBAD 定点突变琼脂糖电泳图 | 第75-76页 |
| 3.4.4 双酶切转化鉴定 | 第76页 |
| 3.4.5 sgrS 连 T 载体双切回收目的片段 | 第76-77页 |
| 3.4.6 sgrS 连 pBAD 载体，双酶切鉴定阳性克隆 | 第77页 |
| 3.4.7 SgrS 过表达对细菌生长的影响 | 第77-78页 |
| 3.4.8 细菌总 RNA 提取 | 第78页 |
| 3.4.9 实时荧光定量 PCR 检测 SgrS 过表达量 | 第78-79页 |
| 3.4.10 荧光定量 PCR 检测靶基因 ptsG 表达水平 | 第79-81页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第81-82页 |
| 总结与展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第91-92页 |
