| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 第1章 绪论 | 第20-29页 |
| 1.1 核受体 | 第20-21页 |
| 1.1.1 核受体分类 | 第20-21页 |
| 1.1.2 核受体结构 | 第21页 |
| 1.2 孤儿受体ROR | 第21-25页 |
| 1.2.1 孤儿受体ROR分类 | 第22-23页 |
| 1.2.2 孤儿受体RORγ的结构 | 第23-24页 |
| 1.2.3 孤儿受体RORγ的致病机理 | 第24页 |
| 1.2.4 孤儿受体ROR相关疾病及研究现状 | 第24-25页 |
| 1.3 孤儿受体RORγ与Th17细胞及自身免疫病的关系 | 第25-27页 |
| 1.3.1 RORγ与免疫细胞的关系 | 第25-26页 |
| 1.3.2 RORγ与自身免疫病 | 第26-27页 |
| 1.4 孤儿受体ROR家族配体研究现状 | 第27-28页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容及意义 | 第28-29页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第29-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-35页 |
| 2.1.1 小分子化合物的来源 | 第29-30页 |
| 2.1.1.1 候选化合物的筛选 | 第29-30页 |
| 2.1.1.2 有效化合物的结构优化 | 第30页 |
| 2.1.2 质粒、菌株及载体 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要试剂与耗材 | 第31-34页 |
| 2.1.4 常用仪器 | 第34-35页 |
| 2.2 实验技术路线 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-50页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第36-37页 |
| 2.3.2 菌种的制备 | 第37-38页 |
| 2.3.2.1 挑取单一菌落 | 第37页 |
| 2.3.2.2 接种甘油菌 | 第37页 |
| 2.3.2.3 菌体的扩大培养 | 第37-38页 |
| 2.3.2.4 菌体的诱导 | 第38页 |
| 2.3.2.5 收菌 | 第38页 |
| 2.3.3 菌体的预处理 | 第38-39页 |
| 2.3.3.1 干菌的解冻重悬 | 第38-39页 |
| 2.3.3.2 菌体的裂解 | 第39页 |
| 2.3.3.3 菌液的过滤 | 第39页 |
| 2.3.4 目的蛋白的纯化及鉴定 | 第39-43页 |
| 2.3.4.1 目的蛋白的初级纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.4.2 目的蛋白的次级纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.4.3 目的蛋白的浓度测定 | 第41-42页 |
| 2.3.4.4 目的蛋白的浓缩 | 第42页 |
| 2.3.4.5 目的蛋白纯度及分子量鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3.5 药物的高通量筛选及结合能力测试实验 | 第43-48页 |
| 2.3.5.1 Alpha Screen实验 | 第44-45页 |
| 2.3.5.2 TSA实验 | 第45-46页 |
| 2.3.5.3 荧光素酶报告基因实验 | 第46-48页 |
| 2.3.6 蛋白结晶实验 | 第48-50页 |
| 第3章 实验结果 | 第50-74页 |
| 3.1 h ROR蛋白纯化结果 | 第50-61页 |
| 3.1.1 h RORγ-LBD (WT)纯化结果 | 第50-53页 |
| 3.1.1.1 h RORγ-LBD (WT)镍柱亲和层析结果 | 第50-52页 |
| 3.1.1.2 h RORγ-LBD (WT)分子筛层析结果 | 第52-53页 |
| 3.1.2 h RORα-LBD (WT)纯化结果 | 第53-55页 |
| 3.1.2.1 h RORα-LBD (WT)镍柱亲和层析结果 | 第53-54页 |
| 3.1.2.2 h RORα-LBD (WT)分子筛层析结果 | 第54-55页 |
| 3.1.3 h RORγ-LBD突变型纯化结果 | 第55-61页 |
| 3.1.3.1 h RORγ-LBD突变型镍柱亲和层析结果 | 第55-60页 |
| 3.1.3.2 h RORγ-LBD (C455E)分子筛层析结果 | 第60-61页 |
| 3.2 ROR蛋白含量测定 | 第61-62页 |
| 3.2.1 Qubit仪器校标结果 | 第61页 |
| 3.2.2 目的蛋白含量测定结果 | 第61-62页 |
| 3.3 h RORγ-LBD (WT)结合能力测试结果 | 第62-68页 |
| 3.3.1 peptide筛选实验结果 | 第62-63页 |
| 3.3.2 Chem Bridge数据库化合物活性筛选 | 第63-64页 |
| 3.3.3 衍生物结合能力测试结果 | 第64-67页 |
| 3.3.4 有效化合物的选择性实验结果 | 第67-68页 |
| 3.4 h RORγ-LBD (C455E)结合能力测试结果 | 第68-70页 |
| 3.5 蛋白结晶及X射线衍射实验结果 | 第70-74页 |
| 3.5.1 h RORγ- LBD (WT)的结晶及X射线衍射结果 | 第70-71页 |
| 3.5.2 h RORγ-LBD (C455E)的结晶及X射线衍射结果 | 第71-74页 |
| 第4章 讨论 | 第74-83页 |
| 4.1 蛋白纯化结果讨论 | 第74-76页 |
| 4.2 结合能力测试结果讨论 | 第76-80页 |
| 4.3 结晶实验讨论 | 第80-81页 |
| 4.4 创新点 | 第81-83页 |
| 第5章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83页 |
| 5.2 展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录 | 第91-119页 |
| 1. 本论文常用质粒基本信息 | 第91页 |
| 2. 本论文常用质粒图谱 | 第91-95页 |
| 3. p ET24a (+)表达载体图谱 | 第95-96页 |
| 4. LB培养基配制 | 第96页 |
| （1）LB液体培养基配制 | 第96页 |
| （2）LB固体培养基配制 | 第96页 |
| 5. 常用溶液配制 | 第96-101页 |
| （1）裂解缓冲液配制 | 第96页 |
| （2）镍柱结合缓冲液配制 | 第96-97页 |
| （3）镍柱洗脱缓冲液配制 | 第97页 |
| （4）分子筛缓冲液配制 | 第97页 |
| （5）Alpha Screen实验缓冲液配制 | 第97-98页 |
| （6）TSA实验缓冲液配制 | 第98页 |
| （7）10×SDS-PAGE电泳缓冲液配制 | 第98页 |
| （8）10% (w/v)过硫酸铵配制 | 第98页 |
| （9）30%丙烯酰胺溶液配制 | 第98-99页 |
| （10）SDS-PAGE分离胶（15%）和浓缩胶配制 | 第99-100页 |
| （11）上样缓冲液配制 | 第100页 |
| （12）染色液、脱色液配制 | 第100-101页 |
| 6. p H计使用 | 第101页 |
| 7. 抗生素配制 | 第101页 |
| 8. IPTG配制 | 第101页 |
| 9. 镍柱再生 | 第101-102页 |
| 10. 本论文peptide序列信息 | 第102页 |
| 11. 细胞培养相关实验 | 第102-104页 |
| （1）细胞复苏 | 第102-103页 |
| （2）贴壁细胞传代 | 第103页 |
| （3）悬浮细胞传代 | 第103页 |
| （4）细胞冻存 | 第103页 |
| （5）细胞计数 | 第103-104页 |
| （6）细胞种板 | 第104页 |
| 12. 质粒提取及浓度测定 | 第104-105页 |
| 13. 感受态细胞的制备 | 第105页 |
| 14. 本论文化合物结构 | 第105-108页 |
| 15. Hampton Research蛋白结晶条件 | 第108-116页 |
| 16. 衍生物 29、36、39 谱图 | 第116-119页 |
| 作者简介及科研成果 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
