| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 英文缩略词表 | 第14-19页 |
| 第1章 绪论 | 第19-39页 |
| 1.1 热休克蛋白 90 | 第19-23页 |
| 1.1.1 热休克蛋白 | 第19页 |
| 1.1.2 热休克蛋白90及其结构 | 第19-21页 |
| 1.1.3 热休克蛋白90的共分子伴侣及客户蛋白 | 第21-22页 |
| 1.1.4 热休克蛋白90与肿瘤的关系 | 第22-23页 |
| 1.2 热休克蛋白90抑制剂 | 第23-30页 |
| 1.2.1 Hsp90的N-端抑制剂 | 第23-27页 |
| 1.2.2 Hsp90的C-端抑制剂 | 第27-29页 |
| 1.2.3 Hsp90的中间结构域抑制剂以及结合位点尚未明确的抑制剂 | 第29-30页 |
| 1.3 热休克蛋白90与共分子伴侣细胞分裂周期蛋白 37 | 第30-34页 |
| 1.3.1 细胞分裂周期蛋白 37 | 第30-32页 |
| 1.3.2 Hsp90/Cdc37抑制剂 | 第32-34页 |
| 1.4 海肾荧光素酶双分子互补技术 | 第34-35页 |
| 1.5 研究目的和理论意义 | 第35-39页 |
| 第2章 基于Hsp90/Cdc37结构的新型Hsp90抑制剂筛选体系的建立 | 第39-73页 |
| 2.1 背景 | 第39-40页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第40-48页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第40页 |
| 2.2.2 试剂和耗材 | 第40-41页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第41-45页 |
| 2.2.4 引物 | 第45-46页 |
| 2.2.5 仪器 | 第46-48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-59页 |
| 2.3.1 重组质粒的构建 | 第48-52页 |
| 2.3.2 IPTG诱导蛋白的表达及纯化 | 第52-55页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析 | 第55-56页 |
| 2.3.4 点突变 | 第56-57页 |
| 2.3.5 互补RL活性优化及化合物处理 | 第57-59页 |
| 2.4 实验结果 | 第59-66页 |
| 2.4.1 质粒构建 | 第59页 |
| 2.4.2 NRL-Hsp90α 和Cdc37-CRL融合蛋白的表达和纯化 | 第59-61页 |
| 2.4.3 互补RL活性的优化 | 第61-63页 |
| 2.4.4 体外SRL-PFAC分析系统的特异性检测 | 第63-64页 |
| 2.4.5 化合物处理 | 第64-66页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第66-73页 |
| 2.5.1 讨论 | 第66-71页 |
| 2.5.2 小结 | 第71-73页 |
| 第3章 芹菜素通过阻断Hsp90/Cdc37抑制胰腺癌细胞生长和迁移作用研究 | 第73-97页 |
| 3.1 背景 | 第73-74页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第74-76页 |
| 3.2.1 材料 | 第74页 |
| 3.2.2 试剂 | 第74-75页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第75-76页 |
| 3.2.4 引物 | 第76页 |
| 3.2.5 仪器 | 第76页 |
| 3.3 实验方法 | 第76-82页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第76-77页 |
| 3.3.2 细胞转染及RL分析 | 第77-78页 |
| 3.3.3 点突变 | 第78-79页 |
| 3.3.4 免疫印迹和免疫共沉淀 | 第79-80页 |
| 3.3.5 MTS实验分析 | 第80-81页 |
| 3.3.6 划痕实验分析 | 第81页 |
| 3.3.7 胞内ROS检测分析 | 第81-82页 |
| 3.4 实验结果 | 第82-90页 |
| 3.4.1 SRL-PFAC分析结果表明芹菜素在HEK293细胞中能够阻断Hsp90/Cdc37相互作用 | 第82-85页 |
| 3.4.2 芹菜素阻断Hsp90/Cdc37相互作用的功能并不依赖于CK2激酶活性 | 第85-86页 |
| 3.4.3 芹菜素在胰腺癌细胞中能够阻断Hsp90/Cdc37复合物形成并诱导下游客户蛋白降解 | 第86-87页 |
| 3.4.4 芹菜素能够抑制胰腺癌细胞的生长 | 第87-88页 |
| 3.4.5 芹菜素能够抑制胰腺癌细胞的迁移 | 第88-89页 |
| 3.4.6 芹菜素能够在胰腺癌细胞中诱导ROS的积累 | 第89-90页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第90-97页 |
| 3.5.1 讨论 | 第90-96页 |
| 3.5.2 小结 | 第96-97页 |
| 第4章 结论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
