| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 非小细胞肺癌简介 | 第9-10页 |
| 1.2 非小细胞肺癌诊断的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 DNA甲基化及MS-HRM方法简介 | 第11-13页 |
| 1.4 非小细胞肺癌相关基因 | 第13-14页 |
| 1.5 课题的提出和主要内容 | 第14-16页 |
| 1.5.1 课题的提出 | 第14-15页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 甲基化敏感的高分辨率熔解曲线(MS-HRM)方法的建立 | 第16-29页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.2 实验仪器、耗材 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-21页 |
| 2.2.1 DNA样品的准备 | 第17页 |
| 2.2.2 全基因组DNA模板的亚硫酸盐转化处理 | 第17-19页 |
| 2.2.3 引物的设计及合成 | 第19-20页 |
| 2.2.4 MS-HRM实验条件的优化 | 第20页 |
| 2.2.5 MS-HRM标准曲线的建立 | 第20-21页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第21-28页 |
| 2.3.1 六个基因的MS-HRM反应条件优化结果 | 第21-23页 |
| 2.3.2 MS-HRM标准曲线的建立 | 第23-28页 |
| 2.4 本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 MS-HRM方法在检测临床病人组织样本中的应用 | 第29-42页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第30页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 实验仪器、耗材 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 3.2.1 非小细胞肺癌病人组织样本的收集 | 第31页 |
| 3.2.2 组织中RNA/DNA的提取 | 第31-33页 |
| 3.2.3 全基因组DNA样品的亚硫酸盐转化处理 | 第33-34页 |
| 3.2.4 转化后的样本DNA的全基因组扩增 | 第34-36页 |
| 3.2.5 等温扩增标准品模板的稀释条件 | 第36页 |
| 3.2.6 组织DNA样本的MS-HRM实验 | 第36页 |
| 3.2.7 各基因的甲基化检出率与临床关系评价 | 第36页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第36-41页 |
| 3.3.1 等温扩增标准品模板稀释条件的选择 | 第36-38页 |
| 3.3.2 组织样本DNA的甲基化检测结果 | 第38-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 焦磷酸测序和ROC分析对MS-HRM方法的验证 | 第42-55页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第42-44页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.2 实验仪器、耗材 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 甲基化水平的定量计算 | 第44页 |
| 4.2.2 焦磷酸测序对MS-HRM的验证 | 第44-46页 |
| 4.2.3 对基因甲基化程度的ROC曲线分析 | 第46页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第46-54页 |
| 4.3.1 甲基化水平的定量计算结果 | 第46-48页 |
| 4.3.2 用于焦磷酸检测的目的片段的扩增条件 | 第48页 |
| 4.3.3 扩增产物的电泳结果 | 第48-49页 |
| 4.3.4 焦磷酸测序结果与MS-HRM方法的比较 | 第49-53页 |
| 4.3.5 ROC曲线评价及多基因联合检测结果 | 第53-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 结论与创新 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简历 | 第63-64页 |
| 在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第64页 |
