| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第18-27页 |
| 1.1 环糊精概述 | 第18-21页 |
| 1.1.1 环糊精简介 | 第18页 |
| 1.1.2 环糊精结构 | 第18-19页 |
| 1.1.3 环糊精性质 | 第19-20页 |
| 1.1.4 环糊精应用 | 第20-21页 |
| 1.2 环糊精糖基转移酶概述 | 第21-26页 |
| 1.2.1 环糊精糖基转移酶结构 | 第21-22页 |
| 1.2.2 环糊精糖基转移酶的催化作用 | 第22-23页 |
| 1.2.3 环糊精糖基转移酶与底物结合 | 第23-24页 |
| 1.2.4 环糊精葡萄糖基转移性质 | 第24-25页 |
| 1.2.5 环糊精糖基转移酶产物特异性 | 第25-26页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 环糊精葡萄糖基转移酶基因的定点突变 | 第27-37页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 质粒与菌株 | 第28页 |
| 2.2.4 培养基 | 第28页 |
| 2.2.5 相关溶液的配制 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 基因突变方法 | 第28-29页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.3.3 重组质粒提取 | 第30页 |
| 2.3.4 E.coli DMT感受态制备 | 第30-31页 |
| 2.3.5 PCR扩增 | 第31页 |
| 2.3.6 PCR产物消化 | 第31-32页 |
| 2.3.7 转化 | 第32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 Bacillus cereus CGTase 43位氨基酸的重要作用 | 第32-34页 |
| 2.4.2 突变基因的获得 | 第34-36页 |
| 2.4.3 突变体测序结果分析 | 第36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 环糊精糖基转移酶的同源建模与分子对接 | 第37-50页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 供试材料 | 第37-39页 |
| 3.2.2 生物信息数据库和软件 | 第39页 |
| 3.3 实验过程 | 第39-45页 |
| 3.3.1 环糊精糖基转移酶信号肽分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 构建modeller序列文件 | 第40-41页 |
| 3.3.3 搜索建模模板 | 第41-43页 |
| 3.3.4 模板序列和目标序列联配 | 第43页 |
| 3.3.5 模型的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.6 评价模型 | 第44-45页 |
| 3.4 模型优化 | 第45-47页 |
| 3.4.1 RMSD分析 | 第46页 |
| 3.4.2 蛋白质量评估 | 第46-47页 |
| 3.5 分子对接 | 第47-49页 |
| 3.5.1 受体蛋白和配体分子的准备 | 第47页 |
| 3.5.2 准备配体和受体的坐标文件 | 第47页 |
| 3.5.3 AutoDock Vina进行对接 | 第47-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 环糊精糖基转移酶突变基因表达及专一性分析 | 第50-60页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 材料与方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第50页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.2.3 质粒与菌株 | 第50-51页 |
| 4.2.4 培养基及抗生素 | 第51页 |
| 4.2.5 相关溶液的配制 | 第51-52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1 重组质粒的转化 | 第52页 |
| 4.3.2 突变体重组蛋白的表达 | 第52页 |
| 4.3.3 蛋白质电泳检测 | 第52页 |
| 4.3.4 酶活检测 | 第52-53页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 4.4.1 突变酶的表达 | 第53-54页 |
| 4.4.2 定点突变对CGTase酶活的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.3 突变酶对环糊精特异性的影响 | 第55-58页 |
| 4.4.4 突变酶对环糊精产量的影响 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 突变酶的纯化和酶学性质 | 第60-69页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 材料与方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第60页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第60页 |
| 5.2.3 相关溶液的配制 | 第60-61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 5.3.1 突变酶的分离纯化 | 第61页 |
| 5.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第61页 |
| 5.3.3 突变酶的最适温度 | 第61页 |
| 5.3.4 突变酶的最适pH | 第61-62页 |
| 5.3.5 突变酶的温度稳定性 | 第62页 |
| 5.3.6 突变酶的pH稳定性 | 第62页 |
| 5.3.7 动力学测定 | 第62页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 5.4.1 Sephadex G-100凝胶柱层析 | 第62-63页 |
| 5.4.2 突变酶的纯化结果 | 第63-64页 |
| 5.4.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第64页 |
| 5.4.4 温度对突变酶活力的影响 | 第64-65页 |
| 5.4.5 温度对突变酶稳定性的影响 | 第65-66页 |
| 5.4.6 pH对突变酶活力的影响 | 第66-67页 |
| 5.4.7 pH对突变酶稳定性的影响 | 第67页 |
| 5.4.8 突变酶反应动力学的研究 | 第67-68页 |
| 5.5 小结 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 结论 | 第69页 |
| 6.2 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第77页 |