| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词及注解 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素 | 第10-12页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素生物合成研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 小单孢菌 | 第12-13页 |
| 1.2.1 小单孢菌简介 | 第12页 |
| 1.2.2 小单孢菌研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 庆大霉素 | 第13-19页 |
| 1.3.1 庆大霉素简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 庆大霉素生物合成研究进展 | 第14-19页 |
| 1.4 选题依据和研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.3 试剂和工具酶 | 第22页 |
| 2.1.4 溶液与缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第23页 |
| 2.1.6 仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 PCR反应体系 | 第24页 |
| 2.2.2 PCR反应程序 | 第24页 |
| 2.2.3 DNA琼脂糖胶电泳 | 第24-25页 |
| 2.2.4 DNA片段胶回收 | 第25页 |
| 2.2.5 DNA酶切 | 第25页 |
| 2.2.6 酶连 | 第25-26页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第26页 |
| 2.2.8 基因的诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE溶液的配制 | 第27页 |
| 2.2.10 碱裂解法提取小量大肠杆菌质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.11 绛红小单孢菌基因组DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.12 大肠杆菌与绛红小单孢菌的接合转移 | 第29页 |
| 2.2.13 绛红小单孢菌摇瓶发酵 | 第29页 |
| 2.2.14 庆大霉素生物效价测定 | 第29-30页 |
| 2.2.15 代谢产物提取 | 第30页 |
| 2.2.16 TLC分析法 | 第30-31页 |
| 2.2.17 HPLC分析法 | 第31页 |
| 2.2.18 质谱分析法 | 第31-32页 |
| 第三章 genA基因功能的研究 | 第32-43页 |
| 3.1 genA的克隆与表达 | 第32-33页 |
| 3.2 重组质粒pAB103的构建 | 第33-36页 |
| 3.2.1 基因genA同源交换臂的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.2 质粒pAB103的构建及验证 | 第35-36页 |
| 3.3 genA基因框内失活工程菌的筛选 | 第36-38页 |
| 3.3.1 接合子的筛选 | 第36-37页 |
| 3.3.2 单交换工程菌的筛选 | 第37页 |
| 3.3.3 双交换工程菌的筛选 | 第37-38页 |
| 3.4 工程菌GA1048的代谢产物分析 | 第38-39页 |
| 3.5 genA基因回补实验 | 第39-41页 |
| 3.5.1 回补质粒pAB105的构建及验证 | 第39-41页 |
| 3.5.2 回补工程菌的筛选及其代谢产物分析 | 第41页 |
| 3.6 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 genF基因功能的研究 | 第43-52页 |
| 4.1 重组质粒pFB104的构建 | 第43-47页 |
| 4.1.1 基因genF同源交换臂的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.1.2 质粒pFB104的构建及验证 | 第45-47页 |
| 4.2 genF基因框内失活工程菌的筛选 | 第47-49页 |
| 4.2.1 接合子的筛选 | 第47页 |
| 4.2.2 单交换工程菌的筛选 | 第47-48页 |
| 4.2.3 双交换工程菌的筛选 | 第48-49页 |
| 4.3 工程菌GF208的发酵及代谢产物分析 | 第49-51页 |
| 4.3.1 工程菌GF208代谢产物的HPLC分析 | 第49-50页 |
| 4.3.2 工程菌GF208代谢产物的MS分析 | 第50-51页 |
| 4.4 小结 | 第51-52页 |
| 第五章 genB4基因功能的研究 | 第52-62页 |
| 5.1 重组质粒pGB403的构建 | 第52-55页 |
| 5.1.1 基因genB4同源交换臂的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 5.1.2 质粒pGB403的构建及验证 | 第54-55页 |
| 5.2 genB4基因框内失活工程菌的筛选 | 第55-57页 |
| 5.2.1 接合子的筛选 | 第55-56页 |
| 5.2.2 单交换工程菌的筛选 | 第56页 |
| 5.2.3 双交换工程菌的筛选 | 第56-57页 |
| 5.3 工程菌GB4408的发酵及代谢产物分析 | 第57-60页 |
| 5.3.1 工程菌GB4408代谢产物的TLC分析 | 第57-58页 |
| 5.3.2 工程菌GB4408代谢产物的HPLC分析 | 第58-59页 |
| 5.3.3 工程菌GB4408代谢产物的MS分析 | 第59-60页 |
| 5.4 小结 | 第60-62页 |
| 第六章 探索构建一株主产西索霉素的工程菌 | 第62-67页 |
| 6.1 genK和genB4双基因失活工程菌的构建 | 第62-64页 |
| 6.1.1 单交换工程菌的构建 | 第62-63页 |
| 6.1.2 双交换工程菌的筛选 | 第63-64页 |
| 6.2 工程菌GbKB4的发酵及代谢产物的分析 | 第64-66页 |
| 6.2.1 工程菌GbKB4代谢产物的TLC分析 | 第64页 |
| 6.2.2 工程菌GbKB4代谢产物的HPLC分析 | 第64-65页 |
| 6.2.3 工程菌GbKB4代谢产物的MS分析 | 第65-66页 |
| 6.3 小结 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 个人简历 | 第75页 |
