| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 蛋白质二硫键异构酶概述 | 第13-18页 |
| 1.2.1 PDI的分布与基本性质 | 第13页 |
| 1.2.2 PDI的结构特点 | 第13-14页 |
| 1.2.3 PDI的酶学性质 | 第14-15页 |
| 1.2.4 PDI的分子伴侣活性 | 第15-16页 |
| 1.2.5 PDI活性位点氧化还原状态对分子伴侣活性的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.6 PDI在面粉工业中的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统概述 | 第18-21页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统 | 第18-20页 |
| 1.3.2 影响毕赤酵母表达外源蛋白的因素 | 第20-21页 |
| 1.3.3 毕赤酵母表达系统和大肠杆菌表达系统的比较 | 第21页 |
| 1.4 氧化还原剂在饼干制作中的应用 | 第21-23页 |
| 1.5 本课题研究的意义与内容 | 第23-25页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 wPDI真核表达载体构建 | 第25-35页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料及仪器设备 | 第25-27页 |
| 2.2.1 主要菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 主要试剂及培养基的配制 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 wPDI毕赤酵母表达载体的构建 | 第27-30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-34页 |
| 2.4.1 wpdi的PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| 2.4.2 阳性重组表达质粒的构建结果 | 第31-34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 重组w PDI的诱导表达及表达条件优化 | 第35-54页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料及仪器设备 | 第35-40页 |
| 3.2.1 主要菌株和质粒 | 第35页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第35页 |
| 3.2.4 常用试剂及培养基的配制 | 第35-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 重组质粒pPIC9K-wpdi的大量提取 | 第40页 |
| 3.3.2 重组质粒pPIC9K-wpdi的线性化及纯化 | 第40页 |
| 3.3.3 线性化重组质粒电转化入毕赤酵母GS115 | 第40-41页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母阳性转化子筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.5 重组毕赤酵母基因组PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.3.6 重组wPDI的表达菌株筛选 | 第42-43页 |
| 3.3.7 重组wPDI的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.8 重组wPDI还原酶活性测定 | 第44-45页 |
| 3.3.9 重组wPDI的诱导表达条件优化 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.4.1 重组质粒的线性化 | 第46-47页 |
| 3.4.2 毕赤酵母阳性转化子的筛选 | 第47页 |
| 3.4.3 毕赤酵母阳性转化子基因组PCR鉴定 | 第47页 |
| 3.4.4 重组蛋白的表达菌株筛选 | 第47-48页 |
| 3.4.5 重组蛋白的诱导表达条件优化 | 第48-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 重组w PDI的纯化及酶学性质比较 | 第54-71页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料及仪器设备 | 第54-56页 |
| 4.2.1 主要菌株与质粒 | 第54页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第54页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.4 主要溶液的配制 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.3.1 毕赤酵母重组wPDI的大量表达及纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.2 大肠杆菌重组wPDI的大量表达及纯化 | 第57-59页 |
| 4.3.3 重组wPDI的活性测定 | 第59-61页 |
| 4.3.4 重组wPDI的内源荧光光谱分析 | 第61页 |
| 4.4 实验结果 | 第61-69页 |
| 4.4.1 wPDI的纯化结果分析 | 第61-63页 |
| 4.4.2 重组wPDI的活性测定及比较 | 第63-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第五章 重组w PDI对面粉加工品质的影响 | 第71-79页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料及仪器设备 | 第71-72页 |
| 5.2.1 主要仪器设备 | 第71页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 5.3 实验方法 | 第72-74页 |
| 5.3.1 重组wPDI对面粉粉质特性的影响 | 第72页 |
| 5.3.2 重组wPDI对饼干加工品质的影响 | 第72-74页 |
| 5.3.3 数据分析 | 第74页 |
| 5.4 实验结果 | 第74-78页 |
| 5.4.1 重组wPDI对面粉粉质特性的影响 | 第74-76页 |
| 5.4.2 重组wPDI对饼干品质的影响 | 第76-78页 |
| 5.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 结论与展望 | 第79-81页 |
| 一、结论 | 第79页 |
| 二、研究创新点 | 第79-80页 |
| 三、展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92页 |
