| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-24页 |
| 1.1 南极冰藻DNA光修复的来源 | 第14-17页 |
| 1.1.1 南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L的简介 | 第14-15页 |
| 1.1.2 南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L的抗紫外辐射性 | 第15页 |
| 1.1.3 南极冰藻DNA光修复酶的结构特征 | 第15-16页 |
| 1.1.4 DNA光修复酶对受损基因的修复机理 | 第16-17页 |
| 1.1.5 DNA光修复酶的研究进展 | 第17页 |
| 1.2 南极冰藻DNA光修复酶的应用前景 | 第17-19页 |
| 1.2.1 DNA光修复酶的功能性验证 | 第18页 |
| 1.2.2 DNA光修复酶产品的发展趋势 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 脂质体在皮肤外用制剂中的作用原理 | 第18页 |
| 1.2.2.2 皮肤外用脂质体对粒径大小的要求 | 第18-19页 |
| 1.3 脂质体的简介 | 第19-22页 |
| 1.3.1 脂质体的基本概念 | 第19页 |
| 1.3.2 脂质体制备方法 | 第19-21页 |
| 1.3.3 脂质体包封率的测定方法 | 第21-22页 |
| 1.4 脂质体的发展现状及趋势 | 第22页 |
| 1.5 本论文研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 DNA光修复酶的提取、分离和纯化工艺研究 | 第24-40页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-26页 |
| 2.1.1 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.2 仪器 | 第25页 |
| 2.1.3 SDS-PAGE相关试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.1.4 其他试剂的配制 | 第26页 |
| 2.2 实验内容 | 第26-31页 |
| 2.2.1 DNA光修复酶工程菌的构建 | 第26页 |
| 2.2.2 DNA光修复酶工程菌的诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.2.3 DNA光修复酶的提取分离工艺 | 第27页 |
| 2.2.3.1 工程菌离心时间的考察 | 第27页 |
| 2.2.3.2 工程菌破碎时间的考察 | 第27页 |
| 2.2.4 DNA光修复酶的纯化 | 第27页 |
| 2.2.5 DNA光修复酶的SDS-PAGE检测 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.5.2 诱导表达后蛋白的SDS-PAGE检测 | 第28页 |
| 2.2.5.3 纯化后蛋白的SDS-PAGE检测 | 第28页 |
| 2.2.5.4 蛋白最终的SDS-PAGE检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 DNA光修复酶的活性检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 嘧啶二聚体引物的制备 | 第29页 |
| 2.2.6.2 嘧啶二聚体引物稳定性考察 | 第29页 |
| 2.2.6.3 嘧啶二聚体引物的紫外分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7 DNA光修复酶的冷冻干燥工艺研究 | 第30-31页 |
| 2.2.7.1 冻干保护剂的考察 | 第30页 |
| 2.2.7.2 冻干酶粉酶活的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.7.3 冻干酶粉的形态观察 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-38页 |
| 2.3.1 DNA光修复酶提取分离工艺的结果及分析 | 第31页 |
| 2.3.1.1 工程菌离心时间的考察 | 第31页 |
| 2.3.1.2 工程菌破碎时间的考察 | 第31页 |
| 2.3.2 DNA光修复酶的SDS-PAGE检测结果及分析 | 第31-34页 |
| 2.3.2.1 诱导表达后蛋白的SDS-PAGE检测 | 第32页 |
| 2.3.2.2 纯化后蛋白的SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 2.3.2.3 蛋白最终的SDS-PAGE检测 | 第33-34页 |
| 2.3.3 DNA光修复酶的活性检测结果及分析 | 第34-36页 |
| 2.3.3.1 嘧啶二聚体引物的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.3.2 嘧啶二聚体引物稳定性考察结果 | 第35页 |
| 2.3.3.3 嘧啶二聚体引物的紫外分析结果与讨论 | 第35-36页 |
| 2.3.4 DNA光修复酶的冷冻干燥工艺研究结果与讨论 | 第36-38页 |
| 2.3.4.1 冻干保护剂的考察结果 | 第36-37页 |
| 2.3.4.2 冻干酶粉的酶活测定结果 | 第37页 |
| 2.3.4.3 冻干酶粉的形态观察结果 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 南极冰藻DNA光修复酶脂质体及其冻干工艺的研究 | 第40-60页 |
| 3.1 仪器和材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.2 仪器 | 第41页 |
| 3.1.3 其他试剂的配制 | 第41页 |
| 3.2 实验内容 | 第41-47页 |
| 3.2.1 脂质体的制备工艺考察 | 第41-45页 |
| 3.2.1.1 膜材的选择 | 第41-42页 |
| 3.2.1.2 有机相的选择 | 第42页 |
| 3.2.1.3 脂质体制备方法的选择 | 第42-43页 |
| 3.2.1.4 单因素实验 | 第43-44页 |
| 3.2.1.5 正交试验设计 | 第44-45页 |
| 3.2.1.6 正交实验结果验证实验 | 第45页 |
| 3.2.2 脂质体冻干制剂的制备 | 第45-46页 |
| 3.2.2.1 冻干工艺的考察 | 第45-46页 |
| 3.2.2.2 冻干工艺的验证实验 | 第46页 |
| 3.2.2.3 冻干制剂酶活性测定 | 第46页 |
| 3.2.3 南极冰藻DNA光修复酶脂质体的功能性验证 | 第46-47页 |
| 3.2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的活化 | 第47页 |
| 3.2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的浓度确定 | 第47页 |
| 3.2.3.3 DNA光修复酶对菌落成活率的影响 | 第47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-58页 |
| 3.3.1 脂质体制备工艺考察的结果与分析 | 第47-54页 |
| 3.3.1.1 膜材的选择 | 第47-48页 |
| 3.3.1.2 有机相的选择 | 第48-49页 |
| 3.3.1.3 脂质体制备方法的选择 | 第49页 |
| 3.3.1.4 单因素实验 | 第49-53页 |
| 3.3.1.5 正交试验结果及分析 | 第53-54页 |
| 3.3.1.6 正交试验结果的验证实验 | 第54页 |
| 3.3.2 脂质体冻干制剂的制备 | 第54-57页 |
| 3.3.2.1 冻干工艺的考察及结果分析 | 第54-56页 |
| 3.3.2.2 冻干工艺的验证实验 | 第56页 |
| 3.3.2.3 冻干脂质体的酶活测定 | 第56-57页 |
| 3.3.3 DNA光修复酶冻干制剂的功能性验证结果 | 第57-58页 |
| 3.3.3.1 大肠杆菌感受态细胞的活化 | 第57页 |
| 3.3.3.2 大肠杆菌感受态细胞的浓度确定 | 第57页 |
| 3.3.3.3 DNA光修复酶对菌落成活率的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 DNA光修酶光修复酶制剂质量标准的建立 | 第60-74页 |
| 4.1 仪器和材料 | 第60-61页 |
| 4.1.1 试剂 | 第60-61页 |
| 4.1.2 仪器 | 第61页 |
| 4.1.3 其他试剂的配置 | 第61页 |
| 4.2 实验内容 | 第61-64页 |
| 4.2.1 蛋白含量测定方法的研究 | 第61-62页 |
| 4.2.1.1 检测波长的确定 | 第61-62页 |
| 4.2.1.2 波长重复性检测 | 第62页 |
| 4.2.1.3 标准曲线的制备 | 第62页 |
| 4.2.2 方法学的考察 | 第62-63页 |
| 4.2.2.1 专属性考察 | 第62页 |
| 4.2.2.2 稳定性考察 | 第62页 |
| 4.2.2.3 精密度实验 | 第62-63页 |
| 4.2.2.4 回收率实验 | 第63页 |
| 4.2.3 脂质体包封率的测定 | 第63页 |
| 4.2.3.1 离心转速对脂质体包封率的影响 | 第63页 |
| 4.2.3.2 离心时间对脂质体包封率的影响 | 第63页 |
| 4.2.4 脂质体的形态观察 | 第63页 |
| 4.2.5 脂质体的粒径测定 | 第63-64页 |
| 4.2.6 脂质体Zeta电位的测定 | 第64页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第64-72页 |
| 4.3.1 含量测定的紫外分析法的分析 | 第64-65页 |
| 4.3.1.1 检测波长的确定 | 第64页 |
| 4.3.1.2 波长重复性检测 | 第64页 |
| 4.3.1.3 标准曲线的制备 | 第64-65页 |
| 4.3.2 方法学的考察结果及分析 | 第65-68页 |
| 4.3.2.1 专属性考察 | 第65页 |
| 4.3.2.2 稳定性考察 | 第65-67页 |
| 4.3.2.3 精密度实验 | 第67页 |
| 4.3.2.4 回收率实验 | 第67-68页 |
| 4.3.3 脂质体包封率的测定 | 第68-69页 |
| 4.3.3.1 离心转速对脂质体包封率的影响 | 第68页 |
| 4.3.3.2 离心转速对脂质体包封率的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.4 脂质体的形态观察 | 第69-70页 |
| 4.3.5 脂质体的粒径测定结果 | 第70-71页 |
| 4.3.6 脂质体Zeta电位的测定结果 | 第71-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第82-84页 |
