| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-31页 |
| 1.1 N-乙酰氨基葡萄糖的性质与应用 | 第16-18页 |
| 1.1.1 N-乙酰氨基葡萄糖概述 | 第16页 |
| 1.1.2 N-乙酰氨基葡萄糖的应用 | 第16-18页 |
| 1.2 N-乙酰氨基葡萄的来源与生产 | 第18-24页 |
| 1.2.1 几丁质及其衍生物概述 | 第18-19页 |
| 1.2.2 甲壳素及其衍生物的性质 | 第19页 |
| 1.2.3 甲壳素及其衍生物的应用 | 第19-22页 |
| 1.2.4 N-乙酰氨基葡萄糖及其它衍生物的生产 | 第22-24页 |
| 1.3 甲壳素水解酶类概述 | 第24-27页 |
| 1.3.1 几丁质酶 | 第24-25页 |
| 1.3.2 壳聚糖酶 | 第25-26页 |
| 1.3.3 几丁质脱乙酰酶 | 第26-27页 |
| 1.3.4 非专一性酶 | 第27页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第27-28页 |
| 1.5 选题依据与研究意义 | 第28-31页 |
| 1.5.1 本文选题背景 | 第28-29页 |
| 1.5.2 本文选题依据 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第32页 |
| 2.1.5 主要缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.1.6 PCR反应引物 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 目的基因的扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.2 PCR产物的回收 | 第35页 |
| 2.2.3 T4 DNA聚合酶处理PCR片段 | 第35-36页 |
| 2.2.4 重组表达载体的构建 | 第36页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态的制备及酶连产物的转化 | 第36-37页 |
| 2.2.6 重组克隆验证 | 第37页 |
| 2.2.7 质粒DNA的抽提 | 第37-38页 |
| 2.2.8 毕赤酵母感受态的制备与重组质粒的转化 | 第38-39页 |
| 2.2.9 重组菌株的筛选与保存 | 第39页 |
| 2.2.10 毕赤酵母重组菌株的摇瓶发酵 | 第39页 |
| 2.2.11 壳聚糖水解酶类的酶活测定 | 第39-41页 |
| 2.2.12 酶解产物的检测 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-65页 |
| 3.1 NagZ在酵母中的异源表达及酶学性质测定 | 第42-60页 |
| 3.1.1 目的基因nagZ的合成 | 第42-43页 |
| 3.1.2 重组表达载体的构建 | 第43-46页 |
| 3.1.3 pHBM905A-nag Z的转化及重组菌验证 | 第46-47页 |
| 3.1.4 重组菌株的平板法初步筛选 | 第47-48页 |
| 3.1.5 重组酶Nag Z的表达及纯化 | 第48-50页 |
| 3.1.6 重组酶Nag Z的最适温度及温度稳定性 | 第50-51页 |
| 3.1.7 重组酶Nag Z的最适pH及pH稳定性 | 第51页 |
| 3.1.8 金属离子对Nag Z的活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.1.9 重组酶Nag Z的动力学常数的测定 | 第52页 |
| 3.1.10 NagZ的酶解作用分析 | 第52-60页 |
| 3.2 外切氨基葡萄糖苷酶的表达 | 第60-62页 |
| 3.2.1 外切氨基葡萄糖苷酶TK的表达 | 第60-61页 |
| 3.2.2 外切氨基葡萄糖苷酶CSX的表达 | 第61-62页 |
| 3.2.3 外切氨基葡萄糖苷酶GlmAPH的表达 | 第62页 |
| 3.3 偶联壳聚糖酶CSN与Nag Z酶解产生Glc NAc | 第62-65页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第65-68页 |
| 4.1 结果讨论 | 第65-66页 |
| 4.1.1 NagZ在毕赤酵母中的异源表达 | 第65页 |
| 4.1.2 重组NagZ的酶活及酶学性质的测定 | 第65-66页 |
| 4.1.3 重组NagZ的酶解效果的检测 | 第66页 |
| 4.1.4 重组NagZ与CSN偶联酶解几丁质的分析 | 第66页 |
| 4.2 工作展望 | 第66-68页 |
| 4.2.1 NagZ异源表达的稳定性的提高 | 第66-67页 |
| 4.2.2 三种外切氨基葡萄糖苷酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第67页 |
| 4.2.3 偶联酶解实验条件的优化 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
