| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1.1 纳豆激酶及其基因的研究进展 | 第15-24页 |
| 1.1.1 纳豆激酶及其基因的分子结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 纳豆激酶的理化性质 | 第16-17页 |
| 1.1.3 纳豆激酶的溶栓活性与活性测定方法 | 第17-21页 |
| 1.1.4 纳豆激酶基因表达的研究 | 第21-22页 |
| 1.1.5 纳豆激酶的应用前景 | 第22-24页 |
| 1.2 外源基因在转基因植物中高效表达的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.1 蛋白质靶向定位 | 第24页 |
| 1.2.2 优化外源基因密码子 | 第24-25页 |
| 1.2.3 启动子的选择和改造 | 第25页 |
| 1.2.4 添加5’和3’非编码序列 | 第25-26页 |
| 1.2.5 使用核基质附着区(MARs)序列 | 第26页 |
| 1.2.6 插入内含子 | 第26页 |
| 1.3 植物生物反应器生产药用蛋白的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.3.1 植物生物反应器的优点 | 第27页 |
| 1.3.2 植物表达系统 | 第27-31页 |
| 1.3.3 植物生物反应器的应用 | 第31-32页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 纳豆激酶基因密码子的优化设计、合成及植物表达载体的构建 | 第34-54页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.1 菌种、质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 2.1.3 溶液和培养基配方 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-44页 |
| 2.2.1 纳豆激酶基因eNK的克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.2 纳豆激酶基因eNKi的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.3 纳豆激酶基因sNK的设计与合成 | 第39-40页 |
| 2.2.4 纳豆激酶基因sNKi的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.5 纳豆激酶基因eNK,eNKi和sNK,sNKi植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 2.3 结果与分析 | 第44-52页 |
| 2.3.1 eNK基因的克隆与eNKi基因的构建结果 | 第44-46页 |
| 2.3.2 sNK基因的合成与sNKi基因的构建结果 | 第46-49页 |
| 2.3.3 eNK和eNKi基因植物表达载体的获得 | 第49-51页 |
| 2.3.4 sNK和sNKi基因植物表达载体的获得 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 人工合成的纳豆激酶基因在甜瓜和番茄果实中的瞬时表达 | 第54-79页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第55-56页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 3.1.2 菌种、质粒 | 第55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第55-56页 |
| 3.1.5 溶液和培养基配方 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-64页 |
| 3.2.1 植物表达载体转化农杆菌LBA4404 | 第56-58页 |
| 3.2.2 甜瓜果实瞬时表达系统的建立 | 第58-62页 |
| 3.2.3 番茄果实瞬时表达系统的建立 | 第62-64页 |
| 3.3 结果与分析 | 第64-76页 |
| 3.3.1 转纳豆激酶基因植物表达载体农杆菌的获得 | 第64-65页 |
| 3.3.2 纳豆激酶基因在甜瓜果实中瞬时表达的分析 | 第65-73页 |
| 3.3.3 纳豆激酶基因在番茄果实中瞬时表达的分析 | 第73-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-79页 |
| 第四章 人工合成的纳豆激酶基因在番茄中的稳定表达 | 第79-102页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第82-83页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第82页 |
| 4.1.2 菌种、质粒 | 第82页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第82页 |
| 4.1.4 引物 | 第82页 |
| 4.1.5 溶液和培养基配方 | 第82-83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-88页 |
| 4.2.1 番茄组织培养再生体系的建立 | 第83-84页 |
| 4.2.2 番茄遗传转化体系的建立 | 第84-86页 |
| 4.2.3 T_0代转基因番茄植株的检测 | 第86-87页 |
| 4.2.4 转基因番茄植株的加代培养 | 第87-88页 |
| 4.3 结果与分析 | 第88-100页 |
| 4.3.1 番茄高效组织培养再生体系的获得 | 第88-91页 |
| 4.3.2 纳豆激酶基因转化番茄实验结果 | 第91-94页 |
| 4.3.3 T_0代转基因番茄植株的获得 | 第94-96页 |
| 4.3.4 T_1代转基因番茄植株的获得与表达分析 | 第96-99页 |
| 4.3.5 T_2代转基因番茄植株的获得与表达分析 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读博士学位期间论文发表情况 | 第114页 |
