摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
引言 | 第8-10页 |
实验材料 | 第10-12页 |
1 实验细胞 | 第10页 |
2 主要仪器 | 第10-11页 |
3 试剂与药品 | 第11-12页 |
实验方法 | 第12-18页 |
1 MSU晶体的配置 | 第12页 |
2 成骨前体细胞 3T3-E1的复苏、传代、培养、冻存及诱导 | 第12-13页 |
3 MTT法检测MSU对成骨前体细胞 3T3-E1增殖的影响 | 第13页 |
4 碱性磷酸酶、茜素红染色观察成骨前体细胞向成骨的分化情况 | 第13-14页 |
5 RT-PCR检测Runx2、Osterix、Collal I、Osteocalcin、Bip、CHOP、ATF4的mRNA相对表达量 | 第14-15页 |
5.1 总RNA的提取 | 第14页 |
5.2 cDNA的合成 | 第14页 |
5.3 RT- PCR检测mRNA表达水平 | 第14-15页 |
6 Western Blot检测Bip、CHOP、ATF4、eIF2α 蛋白的表达量 | 第15-17页 |
6.1 试剂配制 | 第15-16页 |
6.2 蛋白样品的制备 | 第16页 |
6.3 配置SDS-PAGE凝胶 | 第16页 |
6.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第16页 |
6.5 半干法转膜 | 第16页 |
6.6 封闭 | 第16页 |
6.7 孵育抗体 | 第16-17页 |
6.8 显色 | 第17页 |
7 统计学分析 | 第17-18页 |
实验结果 | 第18-24页 |
1 显微镜下尿酸盐晶体(MSU)的形态 | 第18-19页 |
2 不同浓度的尿酸盐晶体能够抑制成骨前体细胞 3T3-E1的增殖 | 第19-20页 |
3 碱性磷酸酶、茜素红染色显示不同浓度的尿酸盐晶体能够抑制成骨前体细3T3-E1向成骨细胞的分化 | 第20-21页 |
4 mRNA水平显示:不同浓度的尿酸盐晶体(MSU)能够抑制调控成骨前体细胞 3T3-E1向成骨细胞分化的基因runt related transcription factor 2(Runx2), Osterix的表达及分泌Collal I、Osteocalcin的功能 | 第21-22页 |
5 mRNA和蛋白水平显示不同浓度的尿酸盐晶体(MSU)在作用于成骨前体细 3T3-E1增殖分化的过程中,激活Bip、CHOP的表达、降低ATF4、e IF2α 的表达 | 第22-24页 |
讨论 | 第24-26页 |
结论 | 第26-27页 |
参考文献 | 第27-31页 |
综述 | 第31-45页 |
综述参考文献 | 第38-45页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第45-46页 |
缩略词表(附录) | 第46-47页 |
致谢 | 第47-48页 |