摘要 | 第3-5页 |
abstract | 第5-7页 |
中英文缩略词表 | 第11-13页 |
第1章 引言 | 第13-17页 |
第2章 实验材料和方法 | 第17-39页 |
2.1 实验材料、试剂、仪器 | 第17-21页 |
2.1.1 组织标本 | 第17页 |
2.1.2 细胞株 | 第17页 |
2.1.3 抗体 | 第17页 |
2.1.4 实验主要试剂 | 第17-19页 |
2.1.5 实验主要仪器 | 第19-20页 |
2.1.6 实验主要溶液的配制 | 第20-21页 |
2.2 实验方法与步骤 | 第21-39页 |
2.2.1 细胞培养 | 第21页 |
2.2.2 细胞的复苏 | 第21-22页 |
2.2.3 细胞的换液、传代与冻存 | 第22-23页 |
2.2.4 细胞的接种和培养 | 第23页 |
2.2.5 细胞或者组织总蛋白的制备 | 第23-24页 |
2.2.6 总蛋白浓度的测定(BCA法) | 第24页 |
2.2.7 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第24-28页 |
2.2.9 磷酸酶活性检测 | 第28页 |
2.2.10 Real-time PCR检测目的基因的表达 | 第28-31页 |
2.2.11 构建突变型和野生型PRL-3 质粒 | 第31页 |
2.2.12 构建PRL-3 高表达和低表达质粒 | 第31-32页 |
2.2.13 PTEN低表达shRNA的构建 | 第32-33页 |
2.2.14 质粒小量抽提 | 第33-34页 |
2.2.15 质粒中量抽提 | 第34-35页 |
2.2.16 质粒转染 | 第35-36页 |
2.2.17 Transwell细胞迁移实验 | 第36-37页 |
2.2.18 Transwell细胞侵袭实验 | 第37-39页 |
第3章 结果 | 第39-49页 |
3.1 胃癌组织和正常胃黏膜组织中PRL-3 与PTEN表达关系 | 第39-40页 |
3.1.1 组织中PRL-3 表达关系 | 第39-40页 |
3.1.2 组织中PTEN与p-PTEN表达关系 | 第40页 |
3.1.3 PRL-3 磷酸酶活性检测 | 第40页 |
3.2 正常胃黏膜上皮细胞株与不同胃癌细胞株中PRL-3 与PTEN表达关系 | 第40-42页 |
3.2.1 不同细胞株中PRL-3 表达关系 | 第40-42页 |
3.2.2 不同细胞株中PTEN和p-PTEN表达关系 | 第42页 |
3.2.3 不同细胞株中PRL-3 磷酸酶活性变化 | 第42页 |
3.3 PRL-3 磷酸酶活性对胃癌细胞PTEN、p-PTEN表达及侵袭、转移的影响 | 第42-45页 |
3.3.1 突变型与野生型PRL-3 表达及磷酸酶活性检测 | 第42-43页 |
3.3.2 突变型、野生型PRL-3 对PTEN、p-PTEN表达的影响 | 第43-44页 |
3.3.3 突变型、野生型PRL-3 对细胞侵袭、转移能力的影响 | 第44-45页 |
3.4 PRL-3 对基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 表达及对细胞侵袭、转移能力的影响 | 第45页 |
3.4.1 PRL-3 高表达细胞株及PRL-3 低表达细胞株构建及鉴定 | 第45页 |
3.4.2 PRL-3 表达水平对基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 表达的影响 | 第45页 |
3.4.3 PRL-3 表达水平对细胞侵袭、转移能力的影响 | 第45页 |
3.5 PI3K/Akt信号传导通路可能参与了PRL-3 调控胃癌侵袭、转移的过程 | 第45-47页 |
3.6 PRL-3 可能通过调控PTEN影响PI3K/Akt信号通路影响胃癌细胞侵袭、转移 | 第47-49页 |
3.6.1 构建PTEN siRNA质粒,转染PRL-3 稳定低表达细胞株 | 第48页 |
3.6.2 PTEN可能参与了PRL-3 调控PI3K/Akt信号通路的过程中 | 第48页 |
3.6.3 PTEN可能参与了PRL-3 调控胃癌细胞侵袭、转移过程 | 第48-49页 |
第4章 讨论 | 第49-54页 |
第5章 结论 | 第54-55页 |
致谢 | 第55-57页 |
参考文献 | 第57-64页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第64-65页 |
综述 | 第65-77页 |
参考文献 | 第71-77页 |