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异甘草酸镁对P-gp及CYP3A影响及其作用机制的初步研究

中文摘要第10-13页
ABSTRACT第13-15页
英文缩略词(Abbreviation)第16-18页
前言第18-24页
    1 引言第18-19页
    2 CYP3A酶的研究概述第19-20页
    3 P-gp的研究概述第20-21页
    4 PXR的研究概述第21-22页
    5 本课题的研究内容及意义第22-24页
第一部分 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内肝组织中P-gp及CYP3A1酶表达的影响第24-36页
    1 实验材料第24-26页
        1.1 实验动物第24页
        1.2 实验试剂第24页
        1.3 实验仪器第24-25页
        1.4 试剂配制第25-26页
    2 实验方法第26-32页
        2.1 实验动物处理第26-27页
            2.1.1 动物分组第26页
            2.1.2 药物处理第26页
            2.1.3 标本采集第26页
            2.1.4 血清学指标检查第26页
            2.1.5 肝脏组织病理学检测第26-27页
        2.2 荧光定量RT-PCR检测异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1基因的表达第27-29页
            2.2.1 RNA的提取第27页
            2.2.2 RNA含量的测定第27页
            2.2.3 逆转录(RT)第27-28页
            2.2.4 PCR第28-29页
        2.3 Western Blot检测异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶蛋白的表达第29-31页
            2.3.1 蛋白质提取第29-30页
            2.3.2 蛋白浓度的测定(BCA蛋白浓度测定试剂盒)第30页
            2.3.3 制胶与电泳第30-31页
            2.3.4 转膜第31页
            2.3.5 封闭第31页
            2.3.6 一抗孵育第31页
            2.3.7 二抗孵育第31页
            2.3.8 凝胶图像分析第31页
        2.4 统计方法与处理第31-32页
    3 实验结果第32-34页
        3.1 各组大鼠血清学指标第32页
        3.2 各组大鼠肝脏组织病理第32-33页
        3.3 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶基因表达的影响第33页
        3.4 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶蛋白表达的影响第33-34页
    4 讨论第34-36页
第二部分 异甘草酸镁在HepG2细胞中对P-gp功能及CYP3A4酶活性影响的研究第36-46页
    1 实验材料第36-38页
        1.1 细胞株第36页
        1.2 药材与试剂第36页
        1.3 实验仪器第36-37页
        1.4 主要试剂配制第37-38页
    2 实验方法第38-41页
        2.1 细胞冻存和复苏第38页
            2.1.1 细胞复苏第38页
            2.1.2 细胞冻存第38页
        2.2 细胞培养和传代第38-39页
        2.3 细胞计数第39页
        2.4 MTT法确定异甘草酸镁给药浓度第39页
        2.5 流式细胞术测异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积和外排的影响第39-40页
            2.5.1 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积的影响第39-40页
            2.5.2 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123外排的影响第40页
        2.6 异甘草酸镁对HepG2细胞CYP3A4酶活性的影响第40-41页
            2.6.1 蛋白定量第40页
            2.6.2 CYP3A4酶活测定第40-41页
        2.7 统计处理方法第41页
    3 结果第41-44页
        3.1 异甘草酸镁对HepG2细胞活力的影响(MTT法)第41-42页
        3.2 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积和外排的影响第42-43页
        3.3 异甘草酸镁对HepG2细胞内CYP3A4酶活的影响第43-44页
    4 讨论第44-46页
第三部分 异甘草酸镁对HepG2细胞内P-gp、CYP3A4及核受体PXR基因和蛋白水平的影响第46-54页
    1 实验材料第46-48页
        1.1 细胞株第46页
        1.2 药材与试剂第46-47页
        1.3 实验仪器第47页
        1.4 主要试剂配制第47-48页
    2 实验方法第48-50页
        2.1 荧光定量RT-PCR检测异甘草酸镁对HepG2细胞中P-gp、CYP3A4及核受体PXR基因的表达第48-49页
            2.1.1 细胞给药第48页
            2.1.2 RNA的提取第48页
            2.1.3 逆转录(RT)第48页
            2.1.4 PCR第48-49页
        2.2 Western blot检测异甘草酸镁对Hep G2细胞中P-gp和CYP3A4及核受体PXR蛋白的表达第49-50页
            2.2.1 细胞给药第49页
            2.2.2 细胞总蛋白的提取第49-50页
            2.2.3 一抗孵育第50页
        2.3 统计处理方法第50页
    3 结果第50-52页
        3.1 异甘草酸镁对Hep G2细胞内MDR1、CYP3A4酶及核受体PXR mRNA表达的影响第50-51页
            3.1.1 异甘草酸镁对CYP3A4酶、核受体PXR mRNA的诱导作用第50页
            3.1.2 异甘草酸镁对MDR1 mRNA的抑制作用第50-51页
        3.2 异甘草酸镁对Hep G2细胞内P-gp、CYP3A4酶及核受体PXR蛋白表达的影响第51-52页
    4 讨论第52-54页
结论第54-55页
参考文献第55-62页
综述第62-72页
    参考文献第68-72页
附录第72-73页
致谢第73-74页

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