中文摘要 | 第10-13页 |
ABSTRACT | 第13-15页 |
英文缩略词(Abbreviation) | 第16-18页 |
前言 | 第18-24页 |
1 引言 | 第18-19页 |
2 CYP3A酶的研究概述 | 第19-20页 |
3 P-gp的研究概述 | 第20-21页 |
4 PXR的研究概述 | 第21-22页 |
5 本课题的研究内容及意义 | 第22-24页 |
第一部分 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内肝组织中P-gp及CYP3A1酶表达的影响 | 第24-36页 |
1 实验材料 | 第24-26页 |
1.1 实验动物 | 第24页 |
1.2 实验试剂 | 第24页 |
1.3 实验仪器 | 第24-25页 |
1.4 试剂配制 | 第25-26页 |
2 实验方法 | 第26-32页 |
2.1 实验动物处理 | 第26-27页 |
2.1.1 动物分组 | 第26页 |
2.1.2 药物处理 | 第26页 |
2.1.3 标本采集 | 第26页 |
2.1.4 血清学指标检查 | 第26页 |
2.1.5 肝脏组织病理学检测 | 第26-27页 |
2.2 荧光定量RT-PCR检测异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1基因的表达 | 第27-29页 |
2.2.1 RNA的提取 | 第27页 |
2.2.2 RNA含量的测定 | 第27页 |
2.2.3 逆转录(RT) | 第27-28页 |
2.2.4 PCR | 第28-29页 |
2.3 Western Blot检测异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶蛋白的表达 | 第29-31页 |
2.3.1 蛋白质提取 | 第29-30页 |
2.3.2 蛋白浓度的测定(BCA蛋白浓度测定试剂盒) | 第30页 |
2.3.3 制胶与电泳 | 第30-31页 |
2.3.4 转膜 | 第31页 |
2.3.5 封闭 | 第31页 |
2.3.6 一抗孵育 | 第31页 |
2.3.7 二抗孵育 | 第31页 |
2.3.8 凝胶图像分析 | 第31页 |
2.4 统计方法与处理 | 第31-32页 |
3 实验结果 | 第32-34页 |
3.1 各组大鼠血清学指标 | 第32页 |
3.2 各组大鼠肝脏组织病理 | 第32-33页 |
3.3 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶基因表达的影响 | 第33页 |
3.4 异甘草酸镁对急性肝损伤大鼠体内P-gp和CYP3A1酶蛋白表达的影响 | 第33-34页 |
4 讨论 | 第34-36页 |
第二部分 异甘草酸镁在HepG2细胞中对P-gp功能及CYP3A4酶活性影响的研究 | 第36-46页 |
1 实验材料 | 第36-38页 |
1.1 细胞株 | 第36页 |
1.2 药材与试剂 | 第36页 |
1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
1.4 主要试剂配制 | 第37-38页 |
2 实验方法 | 第38-41页 |
2.1 细胞冻存和复苏 | 第38页 |
2.1.1 细胞复苏 | 第38页 |
2.1.2 细胞冻存 | 第38页 |
2.2 细胞培养和传代 | 第38-39页 |
2.3 细胞计数 | 第39页 |
2.4 MTT法确定异甘草酸镁给药浓度 | 第39页 |
2.5 流式细胞术测异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积和外排的影响 | 第39-40页 |
2.5.1 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积的影响 | 第39-40页 |
2.5.2 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123外排的影响 | 第40页 |
2.6 异甘草酸镁对HepG2细胞CYP3A4酶活性的影响 | 第40-41页 |
2.6.1 蛋白定量 | 第40页 |
2.6.2 CYP3A4酶活测定 | 第40-41页 |
2.7 统计处理方法 | 第41页 |
3 结果 | 第41-44页 |
3.1 异甘草酸镁对HepG2细胞活力的影响(MTT法) | 第41-42页 |
3.2 异甘草酸镁对HepG2细胞内罗丹明123蓄积和外排的影响 | 第42-43页 |
3.3 异甘草酸镁对HepG2细胞内CYP3A4酶活的影响 | 第43-44页 |
4 讨论 | 第44-46页 |
第三部分 异甘草酸镁对HepG2细胞内P-gp、CYP3A4及核受体PXR基因和蛋白水平的影响 | 第46-54页 |
1 实验材料 | 第46-48页 |
1.1 细胞株 | 第46页 |
1.2 药材与试剂 | 第46-47页 |
1.3 实验仪器 | 第47页 |
1.4 主要试剂配制 | 第47-48页 |
2 实验方法 | 第48-50页 |
2.1 荧光定量RT-PCR检测异甘草酸镁对HepG2细胞中P-gp、CYP3A4及核受体PXR基因的表达 | 第48-49页 |
2.1.1 细胞给药 | 第48页 |
2.1.2 RNA的提取 | 第48页 |
2.1.3 逆转录(RT) | 第48页 |
2.1.4 PCR | 第48-49页 |
2.2 Western blot检测异甘草酸镁对Hep G2细胞中P-gp和CYP3A4及核受体PXR蛋白的表达 | 第49-50页 |
2.2.1 细胞给药 | 第49页 |
2.2.2 细胞总蛋白的提取 | 第49-50页 |
2.2.3 一抗孵育 | 第50页 |
2.3 统计处理方法 | 第50页 |
3 结果 | 第50-52页 |
3.1 异甘草酸镁对Hep G2细胞内MDR1、CYP3A4酶及核受体PXR mRNA表达的影响 | 第50-51页 |
3.1.1 异甘草酸镁对CYP3A4酶、核受体PXR mRNA的诱导作用 | 第50页 |
3.1.2 异甘草酸镁对MDR1 mRNA的抑制作用 | 第50-51页 |
3.2 异甘草酸镁对Hep G2细胞内P-gp、CYP3A4酶及核受体PXR蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-62页 |
综述 | 第62-72页 |
参考文献 | 第68-72页 |
附录 | 第72-73页 |
致谢 | 第73-74页 |