| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩写词 | 第7-11页 |
| 1 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 果蝇模式生物 | 第11-13页 |
| 1.1.1 果蝇幼虫的脂肪体 | 第12页 |
| 1.1.2 果蝇研究中常用的技术 | 第12-13页 |
| 1.1.2.1 Flp-FRT系统 | 第12-13页 |
| 1.1.2.2 UAS-Gal4系统 | 第13页 |
| 1.2 膜泡运输 | 第13-14页 |
| 1.3 小G蛋白Rab | 第14-15页 |
| 1.4 RabGAP | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 构建质粒 | 第17-24页 |
| 2.2 细胞实验 | 第24-26页 |
| 2.2.1 S2细胞的培养 | 第24页 |
| 2.2.2 Hela细胞的培养 | 第24-25页 |
| 2.2.3 转染 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 Hela细胞的转染,封片 | 第25页 |
| 2.2.3.2 S2细胞的转染 | 第25-26页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第26-27页 |
| 2.4 GAP assay | 第27-29页 |
| 2.4.1 Rab40蛋白的原核表达 | 第27-28页 |
| 2.4.2 Rab40蛋白的纯化 | 第28页 |
| 2.4.3 dTBC22的表达、纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.4 GAP assay反应 | 第29页 |
| 2.5 果蝇实验 | 第29-34页 |
| 2.5.1 果蝇遗传学实验 | 第30-31页 |
| 2.5.2 果蝇脂肪体实验 | 第31-34页 |
| 2.5.2.1 脂肪体的固定封片 | 第31页 |
| 2.5.2.2 果蝇脂肪体的免疫荧光 | 第31-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-54页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 dTBC22参与调节spinster和LAMP的运输 | 第34-38页 |
| 3.3 dTBC22是Rab40的GAP | 第38-45页 |
| 3.3.1 在细胞中筛选能与dTBC22共定位的Rab | 第38-42页 |
| 3.3.2 dTBC22RQ能与Rab40相互作用 | 第42-43页 |
| 3.3.3 dTBC22突变细胞和dTBC22 RNAi细胞中,Rab40的表型发生变化 | 第43-44页 |
| 3.3.4 dTBC22能在体外条件下促进Rab40水解GTP | 第44-45页 |
| 3.4 Rab40参与调节spinster蛋白的运输 | 第45-47页 |
| 3.4.1 在脂肪体中过表达Rab40和Rab40CA,能使spinster蛋白在细胞质中积累 | 第45-46页 |
| 3.4.2 Rab40能与spinster以及LAMP相互作用 | 第46-47页 |
| 3.5 Rab40在细胞中的定位 | 第47-50页 |
| 3.5.1 Rab40主要定位在高尔基体上 | 第47-48页 |
| 3.5.2 Rab40的SOCS结构域能帮助Rab40定位在高尔基体上 | 第48-50页 |
| 3.6 在上述膜泡运输异常的细胞中,spinster和LAMP主要积累在高尔基体中,并且这些细胞中的高尔基体都呈现异常形态 | 第50-54页 |
| 3.6.1 Spinster和LAMP主要积累在高尔基体中 | 第50-52页 |
| 3.6.2 在Rab40CA过表达或dTBC22突变的细胞中,高尔基体均呈现异常形态 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 dTBC22作为Rab40的GAP,能影响Rab40的定位 | 第54-55页 |
| 4.2 dTBC22能够通过Rab40调节spinster和LAMP在细胞内的运输 | 第55-56页 |
| 4.3 Rab40主要定位在高尔基体上 | 第56-57页 |
| 4.4 本课题尚未解决问题 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
