| 目录 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 符号说明 | 第15-18页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 第一章 Echosides的生物合成基因簇 | 第22-48页 |
| 1.1 引言 | 第22页 |
| 1.2 实验材料与方法 | 第22-28页 |
| 1.2.1 菌株、质粒 | 第22-23页 |
| 1.2.2 培养基 | 第23-24页 |
| 1.2.3 常用试剂 | 第24页 |
| 1.2.4 菌种保藏 | 第24页 |
| 1.2.5 链霉菌LZ35 fosmid文库的筛选 | 第24-25页 |
| 1.2.6 抗性基因盒替换阻断链霉菌基因组上的目的基因 | 第25-27页 |
| 1.2.7 LZ35基因阻断突变株代谢产物检测 | 第27-28页 |
| 1.2.8 生物信息学分析 | 第28页 |
| 1.3 实验结果 | 第28-44页 |
| 1.3.1 Echosides生物合成基因簇的克隆 | 第28-31页 |
| 1.3.2 echosides合成基因簇的特征 | 第31-36页 |
| 1.3.3 相关基因的敲除及中间产物的鉴定 | 第36-44页 |
| 1.4 讨论 | 第44-47页 |
| 1.5 结论 | 第47-48页 |
| 第二章 Echosides生物合成中关键酶的功能研究 | 第48-72页 |
| 2.1 引言 | 第48页 |
| 2.2 材料与方法 | 第48-59页 |
| 2.2.1 菌株、质粒、引物 | 第48页 |
| 2.2.2 SLIC法构建EchA/EchC表达载体 | 第48-49页 |
| 2.2.3 酶切连接法构建EchB表达载体 | 第49-50页 |
| 2.2.4 重组EchA的表达与纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.5 重组EchB/EchC蛋白的表达与纯化 | 第51页 |
| 2.2.6 polyporic acid标准品化学合成 | 第51-53页 |
| 2.2.7 EchA的活化(磷酸泛酰巯基乙胺化) | 第53-54页 |
| 2.2.8 重组EchA焦磷酸释放实验 | 第54-56页 |
| 2.2.9 重组EchA体外酶活测定 | 第56-57页 |
| 2.2.10 重组EchA酶动力学参数测定 | 第57-58页 |
| 2.2.11 重组EchB体外酶活测定 | 第58-59页 |
| 2.3 结果 | 第59-69页 |
| 2.3.1 EchA蛋白的异源表达 | 第59-60页 |
| 2.3.2 焦磷酸释放测定EchA的催化活性 | 第60-61页 |
| 2.3.3 重组EchA体外酶活 | 第61-62页 |
| 2.3.4 重组EchA酶动力学参数表征 | 第62-64页 |
| 2.3.5 EchB蛋白的异源表达 | 第64-65页 |
| 2.3.6 重组EchB体外酶活测定 | 第65-67页 |
| 2.3.7 EchC蛋白的异源表达 | 第67-68页 |
| 2.3.8 重组EchC体外酶活初探 | 第68-69页 |
| 2.4 讨论 | 第69-71页 |
| 2.5 结论 | 第71-72页 |
| 第三章 EchB EchC蛋白的初步晶体学研究 | 第72-83页 |
| 3.1 引言 | 第72-73页 |
| 3.2 材料与方法 | 第73-75页 |
| 3.2.1 EchB,EchC表达菌株构建及蛋白纯化 | 第73-74页 |
| 3.2.2 结晶条件的初步筛选 | 第74页 |
| 3.2.3 晶体条件优化 | 第74-75页 |
| 3.2.4 晶体衍射数据收集、处理及结构解析、修正 | 第75页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第75-82页 |
| 3.3.1 EchB蛋白结晶 | 第75-76页 |
| 3.3.2 EchC蛋白结晶 | 第76-77页 |
| 3.3.3 数据收集与模型修正 | 第77-79页 |
| 3.3.4 整体结构描述 | 第79-82页 |
| 3.3.5 未知残留密度 | 第82页 |
| 3.4 结论 | 第82-83页 |
| 第四章 非典型非核糖体肽生物合成(综述) | 第83-100页 |
| 4.1 NRPS组成结构单元 | 第84-87页 |
| 4.2 NRPS的底物装配方式 | 第87-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 附录 | 第106-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第123-131页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第131页 |
