| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-29页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 精氨酸脱亚胺酶概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 精氨酸脱亚胺酶的来源及性质 | 第15-16页 |
| 1.2.2 精氨酸脱亚胺酶的结构 | 第16-18页 |
| 1.3 精氨酸脱亚胺途径的代谢机制 | 第18-19页 |
| 1.4 精氨酸脱亚胺酶的应用 | 第19-22页 |
| 1.4.1 精氨酸脱亚胺酶的抗癌特性 | 第19-21页 |
| 1.4.2 精氨酸脱亚胺酶在口腔中的作用 | 第21-22页 |
| 1.4.3 精氨酸脱亚胺酶可用于生产L-瓜氨酸 | 第22页 |
| 1.5 精氨酸脱亚胺酶的研究现状 | 第22-27页 |
| 1.5.1 精氨酸脱亚胺酶的基因克隆及表达 | 第22-24页 |
| 1.5.2 精氨酸脱亚胺酶的化学修饰 | 第24-25页 |
| 1.5.3 精氨酸脱亚胺酶国内研究现状 | 第25-27页 |
| 1.6 本课题的研究意义和主要研究内容 | 第27-29页 |
| 1.6.1 本课题研究背景和意义 | 第27-28页 |
| 1.6.2 本课题研究内容 | 第28-29页 |
| 第二章 短乳杆菌精氨酸代谢途径分析 | 第29-39页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 菌株 | 第29页 |
| 2.2.2 主要试剂、工具酶和试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.2.4 主要设备 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 常用试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2.3.2 短乳杆菌基因组抽提 | 第31-32页 |
| 2.3.3 短乳杆菌精氨酸脱亚胺酶操纵子克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.4 短乳杆菌精氨酸代谢特征分析 | 第33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-38页 |
| 2.4.1 目标氨基酸检测方法建立 | 第33-34页 |
| 2.4.2 非恒定pH条件下短乳杆菌精氨酸代谢途径分析 | 第34-35页 |
| 2.4.3 恒定pH条件下短乳杆菌精氨酸代谢途径分析 | 第35-36页 |
| 2.4.4 精氨酸水解系统基因簇遗传结构分析 | 第36-37页 |
| 2.4.5 短乳杆菌精氨酸脱亚胺酶代谢途径分析 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 精氨酸脱亚胺酶基因的克隆及表达 | 第39-55页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-42页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第39-41页 |
| 3.2.2 主要试剂、工具酶和试剂盒 | 第41页 |
| 3.2.3 培养基及抗生素 | 第41页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 常用试剂配制 | 第42-43页 |
| 3.3.2 短乳杆菌基因组抽提 | 第43页 |
| 3.3.3 短乳杆菌精氨酸脱亚胺酶基因PCR扩增 | 第43-44页 |
| 3.3.4 感受态细胞制备及热激转化 | 第44-45页 |
| 3.3.5 克隆载体的构建及基因序列分析 | 第45-46页 |
| 3.3.6 表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.3.7 精氨酸脱亚胺酶的重组表达 | 第48页 |
| 3.3.8 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 精氨酸脱亚胺酶基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.4.2 基因序列的测定及同源性分析 | 第50-51页 |
| 3.4.3 重组精氨酸脱亚胺酶的表达 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-55页 |
| 第四章 重组精氨酸脱亚胺酶的纯化及酶学性质研究 | 第55-67页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 培养基及抗生素 | 第56页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 4.3.1 常用试剂配制 | 第56-57页 |
| 4.3.2 粗酶液的制备 | 第57页 |
| 4.3.3 镍柱亲和层析 | 第57-58页 |
| 4.3.4 多级凝胶层析 | 第58页 |
| 4.3.5 纯化蛋白SDS-PAGE凝胶电泳 | 第58页 |
| 4.3.6 重组精氨酸脱亚胺酶分子量的确定 | 第58-59页 |
| 4.3.7 重组精氨酸脱亚胺酶活性测定方法 | 第59页 |
| 4.3.8 重组精氨酸脱亚胺酶最适反应pH | 第59页 |
| 4.3.9 重组精氨酸脱亚胺酶最适反应温度 | 第59-60页 |
| 4.3.10 重组精氨酸脱亚胺酶热稳定性的研究 | 第60页 |
| 4.3.11 重组精氨酸脱亚胺酶动力学常数的测定 | 第60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-65页 |
| 4.4.1 HiPrep DEAE FF离子交换层析 | 第60-61页 |
| 4.4.2 Seperdex~(TM) G-200凝胶过滤 | 第61页 |
| 4.4.3 纯化重组精氨酸脱亚胺酶的SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| 4.4.4 重组精氨酸脱亚胺酶分子量的确定 | 第62-63页 |
| 4.4.5 重组精氨酸脱亚胺酶的最适反应pH | 第63-64页 |
| 4.4.6 重组精氨酸脱亚胺酶的最适反应温度 | 第64页 |
| 4.4.7 重组精氨酸脱亚胺酶热稳定性的研究 | 第64-65页 |
| 4.4.8 重组精氨酸脱亚胺酶动力学常数的测定 | 第65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 总结 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
