| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 己糖激酶生物化学功能 | 第12页 |
| 1.2 植物己糖激酶家族 | 第12-16页 |
| 1.2.1 己糖激酶 | 第12-15页 |
| 1.2.2 葡萄糖激酶 | 第15页 |
| 1.2.3 果糖激酶 | 第15-16页 |
| 1.3 植物己糖激酶与代谢调控 | 第16-20页 |
| 1.3.1 植物己糖激酶与糖信号 | 第16-19页 |
| 1.3.2 植物己糖激酶参与氮同化调控 | 第19-20页 |
| 1.4 植物己糖激酶基因研究现状 | 第20-24页 |
| 1.4.1 高等植物己糖激酶同源基因的分离 | 第20页 |
| 1.4.2 高等植物己糖激酶同源基因的结构 | 第20-21页 |
| 1.4.3 高等植物己糖激酶亚细胞定位 | 第21-23页 |
| 1.4.4 高等植物己糖激酶同源基因的表达 | 第23-24页 |
| 1.5 蛋白表达系统 | 第24-25页 |
| 1.5.1 大肠杆菌表达系统 | 第24页 |
| 1.5.2 酵母表达系统 | 第24-25页 |
| 1.6 植物己糖激酶生物化学特性 | 第25-29页 |
| 1.6.1 植物己糖激酶催化特性 | 第25-26页 |
| 1.6.2 酶抑制剂动力学 | 第26-27页 |
| 1.6.3 酶稳定性 | 第27-28页 |
| 1.6.4 植物己糖激酶结构生物学 | 第28-29页 |
| 1.7 本研究主要内容和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第30-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 水稻种子和工程菌来源 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂与器材 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.4 PCR扩增引物 | 第32页 |
| 2.1.5 主要溶液和常用缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 水稻培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2 总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第34页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR检测OsHX和OsGlnB转录量 | 第34-35页 |
| 2.2.4 植物铵同化相关C/N代谢酶活性测定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 植物组织离子浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.2.6 HXK同工酶活性染色 | 第37页 |
| 2.2.7 OsHXK6基因克隆与重组表达质粒构建 | 第37-39页 |
| 2.2.8 OsHXK6原核表达 | 第39页 |
| 2.2.9 OsHXK6真核表达 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-57页 |
| 3.1 OsHXK5和OsHXK6参与铵同化调节 | 第40-43页 |
| 3.1.1 α-酮戊二酸调节水稻根部铵同化 | 第40-41页 |
| 3.1.2 α-酮戊二酸调节己糖激酶同工酶活性 | 第41-43页 |
| 3.2 OsHXK6基因克隆与序列分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 水稻根总RNA提取和总cDNA第一链合成 | 第43-44页 |
| 3.2.2 OsHXK6基因PCR扩增 | 第44-45页 |
| 3.2.3 OsHXK6基因序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3 重组蛋白OsHXK6-27AA原核表达 | 第47-50页 |
| 3.3.1 重组表达质粒pET-HXK6-27AA构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组蛋白OsHXK6-27AA原核表达SDS-PAGE分析 | 第48-50页 |
| 3.4 原核表达重组蛋白OsHXK6-27AA催化特性 | 第50-53页 |
| 3.4.1 重组蛋白OsHXK6-27AA最适反应条件 | 第50-51页 |
| 3.4.2 重组蛋白OsHXK6-27AA催化活性和抑制剂分析 | 第51-52页 |
| 3.4.3 重组蛋白OsHXK6-27AA热稳定性和金属离子对酶活性影响 | 第52-53页 |
| 3.5 重组蛋白OsHXK6-27AA真核表达 | 第53-55页 |
| 3.5.1 OsHXK6-27AA酵母重组表达质粒构建 | 第53-54页 |
| 3.5.2 OsHXK6-27AA酵母阳性重组子筛选 | 第54-55页 |
| 3.5.3 重组蛋白OsHXK6-27AA真核表达SDS-PAGE分析 | 第55页 |
| 3.6 酵母表达重组蛋白OsHXK6-27AA催化活性和抑制剂分析 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 硕士期间发表/待发表论文 | 第69页 |
| 衷也感谢下基金资助 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
