| 摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-37页 |
| 1.1 乳的生物化学组成 | 第16-18页 |
| 1.1.1 乳中的蛋白质 | 第16-17页 |
| 1.1.2 乳脂 | 第17页 |
| 1.1.3 乳糖 | 第17页 |
| 1.1.4 乳中的其它成分 | 第17-18页 |
| 1.2 乳合成的生化代谢 | 第18-20页 |
| 1.2.1 乳蛋白的合成 | 第18-19页 |
| 1.2.2 乳糖的合成 | 第19页 |
| 1.2.3 乳脂的合成 | 第19-20页 |
| 1.3 乳合成相关基因及信号转导通路 | 第20-26页 |
| 1.3.1 mTOR信号通路 | 第20-21页 |
| 1.3.2 SREBP信号通路 | 第21-22页 |
| 1.3.3 乳糖合成相关基因 | 第22-23页 |
| 1.3.4 PI3K-Akt信号通路 | 第23-25页 |
| 1.3.5 GCN2-e IF2α 信号通路 | 第25-26页 |
| 1.4 营养素和激素对泌乳的调节作用 | 第26-28页 |
| 1.4.1 营养素对泌乳的调节作用 | 第26-27页 |
| 1.4.2 激素对泌乳的调节作用 | 第27-28页 |
| 1.5 NFκB基因的功能研究 | 第28-32页 |
| 1.5.1 NFκB的基本结构与功能 | 第28-29页 |
| 1.5.2 IκB与IKK | 第29-30页 |
| 1.5.3 NFκB的经典信号通路和非经典信号通路 | 第30-31页 |
| 1.5.4 NFκB基因功能的研究进展 | 第31-32页 |
| 1.6 氨酰t RNA合成酶的功能研究 | 第32-35页 |
| 1.6.1 氨酰t RNA合成酶的结构与功能 | 第32-34页 |
| 1.6.2 氨酰t RNA合成酶的非经典功能 | 第34-35页 |
| 1.6.3 甘氨酰t RNA合成酶的研究进展 | 第35页 |
| 1.7 实验目的与意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第39页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化与鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第39-40页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第40页 |
| 2.3 添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1的表达与定位 | 第40-47页 |
| 2.3.1 添加蛋氨酸、雌激素对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第40-47页 |
| 2.3.2 添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1的表达与定位 | 第47页 |
| 2.4 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳合成及细胞增殖的影响 | 第47-52页 |
| 2.4.1 NFκB1基因过表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 2.4.2 NFκB1基因过表达载体的转染 | 第50页 |
| 2.4.3 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第50-51页 |
| 2.4.4 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 2.5 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞乳合成和细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 2.5.1 NFκB1最佳干扰片段及其最佳干扰时间的筛选 | 第52页 |
| 2.5.2 NFκB1干扰片段的转染 | 第52-53页 |
| 2.5.3 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第53页 |
| 2.5.4 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第53页 |
| 2.6 染色质免疫共沉淀分析NFκB1与靶基因启动子的结合 | 第53-57页 |
| 2.6.1 生物信息学预测NFκB1与靶基因启动子的结合位点 | 第53-54页 |
| 2.6.2 Ch IP-PCR分析NFκB1与靶基因启动子的结合 | 第54-56页 |
| 2.6.3 Ch IP-q PCR分析添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1与靶基因启动子的结合 | 第56-57页 |
| 2.7 NFκB1接受蛋氨酸、雌激素信号的机制研究 | 第57-58页 |
| 2.7.1 PI3K和mTOR抑制剂的最佳浓度筛选 | 第57-58页 |
| 2.7.2 同时添加蛋氨酸或雌激素和PI3K抑制剂后对NFκB1表达的影响 | 第58页 |
| 2.8 Gly RS介导氨基酸和激素调节NFκB1的机理研究 | 第58-59页 |
| 2.8.1 过表达Gly RS干扰NFκB1对NFκB1靶基因表达的影响 | 第58页 |
| 2.8.2 添加蛋氨酸、雌激素同时干扰Gly RS对NFκB1的表达与磷酸化的影响 | 第58-59页 |
| 2.8.3 同时干扰Gly RS和GCN2对NFκB1的表达与磷酸化的影响 | 第59页 |
| 2.9 数据分析 | 第59-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-86页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化与鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2 添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1的表达与定位 | 第62-67页 |
| 3.2.1 添加蛋氨酸、雌激素后对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第62-66页 |
| 3.2.2 添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1的表达与定位 | 第66-67页 |
| 3.3 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳合成及细胞增殖的影响 | 第67-72页 |
| 3.3.1 NFκB1基因过表达载体的构建 | 第67页 |
| 3.3.2 NFκB1基因过表达载体的转染 | 第67-68页 |
| 3.3.3 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第68-71页 |
| 3.3.4 NFκB1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第71-72页 |
| 3.4 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞乳合成及细胞增殖的影响 | 第72-77页 |
| 3.4.1 NFκB1最佳干扰片段与时间的筛选 | 第72页 |
| 3.4.2 NFκB1干扰片段的转染 | 第72-73页 |
| 3.4.3 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第73-76页 |
| 3.4.4 NFκB1基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第76-77页 |
| 3.5 染色质免疫共沉淀分析NFκB1与乳合成及细胞增殖相关靶基因启动子的结合 | 第77-80页 |
| 3.5.1 NFκB1与靶基因启动子结合位点的预测 | 第77-78页 |
| 3.5.2 染色质免疫共沉淀检测NFκB1与靶基因启动子的结合 | 第78-79页 |
| 3.5.3 Ch IP分析添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1与靶基因启动子的结合 | 第79-80页 |
| 3.6 NFκB1接受蛋氨酸、雌激素调控乳合成及细胞增殖的机理研究 | 第80-83页 |
| 3.6.1 PI3K和mTOR抑制剂的最佳浓度筛选及其对NFκB1表达的影响 | 第80-81页 |
| 3.6.2 添加蛋氨酸、雌激素并抑制PI3K信号通路后NFκB1的表达 | 第81-83页 |
| 3.7 Gly RS介导氨基酸和激素调节NFκB1的机理研究 | 第83-86页 |
| 3.7.1 过表达Gly RS、干扰NFκB1后NFκB1靶基因的表达 | 第83页 |
| 3.7.2 添加蛋氨酸、雌激素同时干扰Gly RS对NFκB1的表达与磷酸化的影响 | 第83-84页 |
| 3.7.3 干扰Gly RS同时干扰GCN2对NFκB1的表达与磷酸化的影响 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-93页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化与鉴定 | 第86-87页 |
| 4.2 添加蛋氨酸、雌激素后NFκB1的表达与定位 | 第87页 |
| 4.3 NFκB1对奶牛乳腺上皮细胞乳合成及细胞增殖的影响 | 第87-89页 |
| 4.3.1 NFκB1对奶牛乳腺上皮细胞乳合成的影响 | 第87-88页 |
| 4.3.2 NFκB1对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.3 NFκB1对IκBα 表达的影响 | 第89页 |
| 4.4 NFκB1对靶基因表达的调控 | 第89-90页 |
| 4.5 蛋氨酸、雌激素通过PI3K途径激活NFκB1 | 第90-91页 |
| 4.6 Gly RS对NFκB1的表达与磷酸化的影响 | 第91页 |
| 4.7 总结 | 第91-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 附录 | 第106-108页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第108页 |
