| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 右旋糖酐蔗糖酶起源 | 第17页 |
| 1.2 右旋糖酐概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1 右旋糖酐应用 | 第17-18页 |
| 1.2.2 右旋糖酐及产物的特异性 | 第18-19页 |
| 1.3 右旋糖酐蔗糖酶产生菌 | 第19-22页 |
| 1.4 右旋糖酐蔗糖酶催化机制 | 第22-23页 |
| 1.5 右旋糖酐蔗糖酶结构 | 第23-25页 |
| 1.6 课题研究意义 | 第25-26页 |
| 1.7 研究内容和思路 | 第26-28页 |
| 第二章 右旋糖酐蔗糖酶分子截短突变研究 | 第28-46页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.4 相关试剂配制 | 第31-32页 |
| 2.2.5 基因截短 | 第32页 |
| 2.2.6 重组质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.2.7 PCR扩增 | 第33页 |
| 2.2.8 右旋糖酐蔗糖酶制备 | 第33-34页 |
| 2.2.9 酶活测定 | 第34页 |
| 2.2.10 HPLC检测 | 第34页 |
| 2.2.11 突变酶性质优化 | 第34-35页 |
| 1. 酶的最适反应pH值及pH稳定性 | 第34-35页 |
| 2. 酶的最适反应温度及热稳定性 | 第35页 |
| 2.3 结论与分析 | 第35-43页 |
| 2.3.1 右旋糖酐蔗糖酶基因dex-YG比对分析 | 第35页 |
| 2.3.2 右旋糖酐蔗糖酶截短突变研究 | 第35-37页 |
| 2.3.3 截短突变基因构建、表达以及突变菌株测定 | 第37-38页 |
| 2.3.4 酶的最适反应温度 | 第38-39页 |
| 2.3.5 酶的最适反应pH值 | 第39-40页 |
| 2.3.6 截短突变活性以及产物性质分析 | 第40-43页 |
| 2.4 小结 | 第43-46页 |
| 第三章 右旋糖酐蔗糖酶定点突变及特异性分析 | 第46-57页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第46-50页 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器 | 第46-48页 |
| 3.2.2 基因突变方法 | 第48页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第48-49页 |
| 3.2.4 PCR产物消化 | 第49-50页 |
| 3.2.5 HPLC检测 | 第50页 |
| 3.2.6 糖苷键检测 | 第50页 |
| 3.3 结论与分析 | 第50-56页 |
| 3.3.1 分子对接模型分析以及突变位点选择 | 第50-52页 |
| 3.3.2 野生型以及突变型酶催化活性研究 | 第52页 |
| 3.3.3 突变酶合成糖酐键型分析研究 | 第52-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 右旋糖酐蔗糖酶插入突变及不同键型右旋糖酐制备 | 第57-72页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第57-62页 |
| 4.2.1 主要试剂与仪器设备 | 第57-59页 |
| 4.2.2 氨基酸插入方法 | 第59-60页 |
| 4.2.3 引物设计 | 第60-61页 |
| 4.2.4 红外光谱检测右旋糖酐特征官能团 | 第61页 |
| 4.2.5 差示扫描量热法测定产物结构 | 第61页 |
| 4.2.6 突变酶纯化制备 | 第61-62页 |
| 4.2.7 实验方案 | 第62页 |
| 4.3 结论与分析 | 第62-70页 |
| 4.3.1 蛋白模型分析 | 第62-63页 |
| 4.3.2 插入位点选择 | 第63-64页 |
| 4.3.3 PCR验证目的基因以及产物结果 | 第64页 |
| 4.3.4 突变酶表达SDS-PAGE检验 | 第64-65页 |
| 4.3.5 突变酶合成多糖热稳定测定 | 第65-66页 |
| 4.3.6 红外光谱检测 | 第66-67页 |
| 4.3.7 插入氨基酸突变型活性检测 | 第67-69页 |
| 4.3.8 氨基酸插入产物右旋糖酐性质检测 | 第69-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第81页 |
| 攻读硕士学位期间申请专利 | 第81-82页 |
