| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第13页 |
| 1.2 乳酸菌的益生作用及其在基因工程中的应用 | 第13-16页 |
| 1.2.1 乳酸菌的益生性作用 | 第14页 |
| 1.2.2 基因工程乳酸菌的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 基因工程乳酸乳球菌的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 乳酸菌食品级表达系统的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.3.1 食品级选择标记研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.2 乳酸菌基因组整合系统的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4 基因工程（转基因）乳酸菌的安全性评价 | 第22-25页 |
| 1.4.1 基因工程（转基因）乳酸菌安全性评价的必要性 | 第22-23页 |
| 1.4.2 细菌转录组测序的研究进展 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-52页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 载体质粒和菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 主要生物化学试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 引物合成与测序 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-52页 |
| 2.2.1 乳球菌pGBWVHC32-upp载体的构建 | 第26-30页 |
| 2.2.2 pGBWVHC32-upp载体在L. lactis MG1363中的温度敏感性试验 | 第30-31页 |
| 2.2.3 基因打靶整合型载体的构建 | 第31-43页 |
| 2.2.4 缺失upp基因L. lactis MG1363的构建 | 第43-45页 |
| 2.2.5 缺失upp基因L. lactis MG1363的生物学特性分析 | 第45-48页 |
| 2.2.6 Upp基因缺陷互补型质粒载体系统的构建 | 第48-52页 |
| 3 结果 | 第52-76页 |
| 3.1 乳球菌pGBWVHC32-upp载体的构建结果 | 第52-54页 |
| 3.1.1 upp基因的扩增和测序结果 | 第52页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD18-T-upp的鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.1.3 pGBWVHC32-upp载体的鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.2 pGBWVHC32-upp载体在乳球菌中的温度敏感性试验结果 | 第54页 |
| 3.3 基因打靶整合型载体的构建结果 | 第54-62页 |
| 3.3.1 Upp基因两侧同源臂基因扩增结果 | 第54-55页 |
| 3.3.2 重组质粒pMD18-T-1L/2L/1R/2R的鉴定结果 | 第55-57页 |
| 3.3.3 pGBWVHC32-upp-1L载体的鉴定结果 | 第57页 |
| 3.3.4 基因打靶整合型载体pGBWVHC32-upp-1L1R的鉴定结果 | 第57-58页 |
| 3.3.5 基因打靶整合型载体pGBWVHC32-upp-1L2R的鉴定结果 | 第58-59页 |
| 3.3.6 pGBWVHC32-upp-2L载体的鉴定结果 | 第59-60页 |
| 3.3.7 基因打靶整合型载体pGBWVHC32-upp-2L1R的鉴定结果 | 第60-61页 |
| 3.3.8 基因打靶整合型载体pGBWVHC32-upp-2L2R的鉴定结果 | 第61-62页 |
| 3.4 缺失upp基因的L. lactis MG1363菌株的获得 | 第62-65页 |
| 3.4.1 缺失upp基因的L. lactis MG1363菌株的PCR鉴定结果 | 第62-64页 |
| 3.4.2 缺失upp基因的L. lactis MG1363菌株中的质粒残留鉴定结果 | 第64页 |
| 3.4.3 缺失upp基因的L. lactis MG1363菌株upp基因区域的测序结果 | 第64-65页 |
| 3.5 缺失upp基因的L. lactis MG1363菌株的生物学特性分析结果 | 第65-73页 |
| 3.5.1 缺失upp基因的L. lactis MG1363的遗传稳定性测试结果 | 第65页 |
| 3.5.2 缺失upp基因的L. lactis MG1363和野生菌株生长曲线比较结果 | 第65页 |
| 3.5.3 缺失upp基因的L. lactis MG1363和野生菌株碳源利用结果 | 第65-67页 |
| 3.5.4 缺失upp基因的L. lactis MG1363和野生菌株的形态学比较结果 | 第67页 |
| 3.5.5 缺失upp基因的L. lactis MG1363和野生菌株的转录组测序结果 | 第67-73页 |
| 3.6 Upp基因缺陷互补型质粒载体系统的构建及CaIFN-γ 蛋白的表达 | 第73-76页 |
| 3.6.1 Upp基因和pAMJ399-CaIFN-γ 的扩增结果 | 第73-74页 |
| 3.6.2 重组乳球菌pAMJ399upp-CaIFN-γ/△upp L. lactis MG1363的鉴定结果 | 第74-75页 |
| 3.6.3 重组L. lactis MG1363表达CaIFN-γ 蛋白的鉴定 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| 4.1 温敏型质粒和反选择标记在乳酸菌基因操作中的应用 | 第76-77页 |
| 4.2 乳酸乳球菌upp缺失菌株的生物学特性 | 第77-78页 |
| 4.3 Upp基因缺陷互补型质粒载体系统在L. lactis MG1363表达系统中的使用 | 第78-80页 |
| 5 结论 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 | 第91-95页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第95页 |
