云南大叶种茶树多酚氧化酶的分离纯化与性质研究
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 云南大叶种简介 | 第12-13页 |
| 2 多酚氧化酶概述 | 第13-20页 |
| 2.1 PPO的分类和细胞定位 | 第13-14页 |
| 2.2 PPO的分子结构 | 第14-15页 |
| 2.2.1 基因特性 | 第14页 |
| 2.2.2 导肽 | 第14-15页 |
| 2.2.3 保守序列 | 第15页 |
| 2.2.4 内含子 | 第15页 |
| 2.3 PPO的生化特性 | 第15-17页 |
| 2.3.1 水果果实PPO | 第16页 |
| 2.3.2 易褐变蔬菜PPO | 第16-17页 |
| 2.3.3 食用菌PPO | 第17页 |
| 2.3.4 茶叶、烟草、桑叶、牡丹PPO | 第17页 |
| 2.4 PPO的生理功能 | 第17-19页 |
| 2.4.1 PPO的酶促褐变功能 | 第17-18页 |
| 2.4.2 PPO在茶叶加工中的作用 | 第18页 |
| 2.4.3 PPO对烟叶香味品质的影响 | 第18页 |
| 2.4.4 PPO的植物生理作用 | 第18-19页 |
| 2.5 PPO在茶产业的应用 | 第19-20页 |
| 3 课题研究目的、意义 | 第20-21页 |
| 第二章 云南大叶种茶树PPO的提取 | 第21-31页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 1.1 PPO的提取 | 第21页 |
| 1.2 PPO的酶活测定 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-25页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 不同pH缓冲液提取凤庆PPO | 第23页 |
| 2.2.2 不同PVP添加量提取凤庆PPO | 第23页 |
| 2.2.3 不同料液比提取凤庆PPO | 第23-24页 |
| 2.2.4 酶活检测 | 第24页 |
| 2.2.5 Native-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 3.1 缓冲液pH对凤庆PPO提取的影响 | 第25-26页 |
| 3.2 PVP添加量对凤庆PPO提取的影响 | 第26-27页 |
| 3.3 料液比对凤庆PPO提取的影响 | 第27-29页 |
| 3.4 小结 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 4.1 PPO的提取方法 | 第29-30页 |
| 4.2 PPO的缓冲液匀浆浸提工艺 | 第30-31页 |
| 第三章 云南大叶种茶树PPO同工酶的分离纯化 | 第31-56页 |
| 1 前言 | 第31-33页 |
| 1.1 沉淀分离 | 第31页 |
| 1.2 层析分离 | 第31-32页 |
| 1.3 电泳技术 | 第32页 |
| 1.4 电泳染色 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 2.1.4 试剂溶液配制 | 第33-34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 提取 | 第34页 |
| 2.2.2 硫酸铵分级沉淀 | 第34页 |
| 2.2.3 透析浓缩 | 第34页 |
| 2.2.4 离子交换层析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 凝胶过滤层析 | 第35页 |
| 2.2.6 酶活检测（酶标仪测定） | 第35页 |
| 2.2.7 蛋白含量检测 | 第35-36页 |
| 2.2.8 Native-PAGE检测 | 第36页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE检测 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-52页 |
| 3.1 凤庆PPO初分离纯化效果 | 第36-37页 |
| 3.1.1 活力及纯化倍数 | 第36-37页 |
| 3.1.2 蛋白含量及回收率 | 第37页 |
| 3.2 离子交换层析结果 | 第37-40页 |
| 3.3 Native-PAGE结果 | 第40页 |
| 3.4 SDS-PAGE结果 | 第40-41页 |
| 3.5 凝胶过滤层析结果 | 第41-51页 |
| 3.5.1 离子交换层析洗脱峰1的分子筛结果 | 第41-45页 |
| 3.5.2 离子交换层析洗脱峰2的分子筛结果 | 第45-47页 |
| 3.5.3 离子交换层析洗脱峰6的分子筛结果 | 第47-49页 |
| 3.5.4 离子交换层析洗脱峰9的分子筛结果 | 第49-51页 |
| 3.6 云南大叶种茶树PPO分离纯化效果 | 第51-52页 |
| 3.7 小结 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 PPO初分离 | 第53-54页 |
| 4.2 PPO柱层析 | 第54页 |
| 4.3 PPO分子量 | 第54-56页 |
| 第四章 云南大叶种茶树PPO同工酶性质研究 | 第56-70页 |
| 1 前言 | 第56-57页 |
| 1.1 最适温度 | 第56页 |
| 1.2 最适pH | 第56页 |
| 1.3 最适底物 | 第56-57页 |
| 1.4 金属离子对PPO的影响 | 第57页 |
| 1.5 抑制剂的作用 | 第57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-60页 |
| 2.1 试验材料 | 第57-58页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第57-58页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第58页 |
| 2.1.4 试剂溶液配制 | 第58页 |
| 2.2 试验方法 | 第58-60页 |
| 2.2.1 温度对凤庆PPO的影响 | 第58页 |
| 2.2.2 pH对凤庆PPO的影响 | 第58页 |
| 2.2.3 Cu2+对凤庆PPO的作用 | 第58-59页 |
| 2.2.4 抑制剂对凤庆PPO的作用 | 第59页 |
| 2.2.5 底物对凤庆PPO的影响 | 第59-60页 |
| 2.2.6 酶动力学 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-66页 |
| 3.1 凤庆PPO的最适反应温度 | 第60-61页 |
| 3.2 凤庆PPO的最适反应pH | 第61页 |
| 3.3 Cu2+对凤庆PPO的作用 | 第61-62页 |
| 3.4 抑制剂对凤庆PPO的作用 | 第62-63页 |
| 3.5 凤庆PPO的底物特异性 | 第63-64页 |
| 3.6 凤庆PPO酶动力学参数 | 第64-65页 |
| 3.7 小结 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 酶促反应最适条件 | 第66-68页 |
| 4.1.1 最适pH | 第66页 |
| 4.1.2 最适温度 | 第66-67页 |
| 4.1.3 底物特异性 | 第67页 |
| 4.1.4 酶动力学 | 第67-68页 |
| 4.2 外源物质调控 | 第68-70页 |
| 4.2.1 Cu2+的作用 | 第68-69页 |
| 4.2.2 抑制剂 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
