| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 材料与方法 | 第12-33页 |
| 1 材料 | 第12-16页 |
| 1.1 组织芯片和细胞株 | 第12页 |
| 1.2 质粒和菌种 | 第12页 |
| 1.3 主要试剂 | 第12-14页 |
| 1.4 主要仪器 | 第14页 |
| 1.5 主要耗材 | 第14-15页 |
| 1.6 主要溶液配制 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-33页 |
| 2.1 免疫组织化学(Envision二步法) | 第16-17页 |
| 2.2 细胞复苏、传代和冻存 | 第17-19页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第19-21页 |
| 2.3.1 人结直肠癌细胞RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.3.2 逆转录合成cDNA和实时荧光定量反应 | 第20-21页 |
| 2.4 人SRPX2基因的克隆 | 第21-26页 |
| 2.4.1 RT-PCR获取目的基因 | 第21-23页 |
| 2.4.2 克隆测序 | 第23-25页 |
| 2.4.3 目的基因亚克隆 | 第25-26页 |
| 2.5 脂质体转染细胞 | 第26-27页 |
| 2.5.1 细胞常规培养 | 第26页 |
| 2.5.2 基因的转染 | 第26-27页 |
| 2.6 转染后实时荧光定量PCR实验 | 第27-28页 |
| 2.6.1 细胞准备 | 第27页 |
| 2.6.2 实验细胞分组 | 第27页 |
| 2.6.3 转染前后SW480细胞总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.6.4 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.6.5 逆转录反应 | 第28页 |
| 2.6.6 PCR反应 | 第28页 |
| 2.7 蛋白免疫印迹实验(Western Blot) | 第28-30页 |
| 2.7.1 实验细胞分组 | 第28-29页 |
| 2.7.2 细胞总蛋白的提取 | 第29页 |
| 2.7.3 细胞总蛋白浓度的测定(BCA法) | 第29页 |
| 2.7.4 电泳分离 | 第29-30页 |
| 2.8 细胞增殖实验 | 第30-31页 |
| 2.9 Transwell侵袭及迁移实验 | 第31-32页 |
| 2.9.1 Transwell侵袭实验 | 第31-32页 |
| 2.9.2 Transwell迁移实验 | 第32页 |
| 2.10 统计学分析 | 第32-33页 |
| 实验结果 | 第33-43页 |
| 1 SRPX2蛋白在结肠癌和癌旁组织中的表达情况 | 第33页 |
| 2 SRPX2 mRNA在不用结肠癌细胞株中的表达情况 | 第33-35页 |
| 2.1 人结肠癌细胞总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2 不同结肠癌细胞株SRPX2 mRNA的相对表达量 | 第34-35页 |
| 3 SRPX2基因的成功克隆及测序鉴定 | 第35-37页 |
| 4 SRPX2基因真核表达载体的构建及双酶切鉴定 | 第37页 |
| 5 转染效率优化的图片及转染后PCR结果 | 第37-39页 |
| 5.1 以pcDNA3.1-EGFP质粒优化转染SW480细胞 | 第37-38页 |
| 5.2 转染前后SW480细胞中SRPX2 mRNA的表达差异 | 第38-39页 |
| 6 蛋白免疫印迹结果(Western blot) | 第39-40页 |
| 6.1 BCA法测定蛋白样品浓度结果 | 第39页 |
| 6.2 不同结肠癌细胞中SRPX2蛋白的表达情况 | 第39-40页 |
| 6.3 转染前后SW480细胞中SRPX2蛋白的改变 | 第40页 |
| 7 细胞增殖实验结果 | 第40-41页 |
| 8 Transwell侵袭实验结果 | 第41-42页 |
| 9 Transwell迁移实验结果 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 缩略词表 | 第53-55页 |
| 在学期间的研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
