| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 α-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 α-葡萄糖苷酶的来源与分类 | 第10页 |
| 1.1.2 α-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第10-12页 |
| 1.1.3 α-葡萄糖苷酶的结构与催化中心 | 第12页 |
| 1.1.4 α-葡萄糖苷酶活力的测定 | 第12-13页 |
| 1.1.5 α-葡萄糖苷酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.6 α-葡萄糖苷酶的研究前景 | 第14页 |
| 1.2 糖化酶的研究概况 | 第14-17页 |
| 1.2.1 糖化酶的理化性质 | 第15页 |
| 1.2.2 糖化酶的结构及作用原理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 α-葡萄糖苷酶与糖化酶之间的关系 | 第16页 |
| 1.2.4 糖化酶基因的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.3 Split-Marker技术 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的及主要内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 研究目的及意义 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-20页 |
| 第2章 材料和方法 | 第20-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂及常用溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 生化试剂、试剂盒与酶 | 第23-24页 |
| 2.1.6 寡聚核苷酸引物 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-46页 |
| 2.2.1 基本实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.2 常用试剂盒操作 | 第30-32页 |
| 2.2.3 表达盒的构建方法 | 第32-35页 |
| 2.2.4 黑曲霉突变株的获得 | 第35-38页 |
| 2.2.5 黑曲霉突变体的表型分析 | 第38-46页 |
| 第3章 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.1 黑曲霉HE01敲除表达盒的构建 | 第46-49页 |
| 3.1.1 黑曲霉HE01基因组DNA的提取 | 第46页 |
| 3.1.2 黑曲霉糖化酶基因的上下游同源序列与选择性标记基因的扩增与分析 | 第46-47页 |
| 3.1.3 敲除表达盒的构建 | 第47-48页 |
| 3.1.4 获得大肠杆菌阳性转化子 | 第48-49页 |
| 3.2 黑曲霉HE01突变株的鉴定与获得 | 第49-51页 |
| 3.2.1 黑曲霉HE01原生质体的转化 | 第49-50页 |
| 3.2.2 黑曲霉HE01突变株的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 黑曲霉出发菌株与突变菌株的表型分析 | 第51-64页 |
| 3.3.1 出发菌株与突变菌株的菌丝形态 | 第51-52页 |
| 3.3.2 生物量的测定 | 第52-54页 |
| 3.3.3 酶活的测定 | 第54-57页 |
| 3.3.4 荧光定量PCR | 第57-59页 |
| 3.3.5 α-葡萄糖苷酶转苷产物的测定 | 第59-64页 |
| 第4章 讨论 | 第64-68页 |
| 4.1 融合基因的获得 | 第64-65页 |
| 4.2 平末端片段加A尾 | 第65页 |
| 4.3 黑曲霉原生质体的转化 | 第65-66页 |
| 4.4 α-葡萄糖苷酶与糖化酶酶活分析 | 第66-67页 |
| 4.5 高效液相色谱测量α-葡萄糖苷酶转苷反应 | 第67页 |
| 4.6 创新点及展望 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |