| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 研究工作的背景及意义 | 第11页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2.1 氟离子对细菌抑制杀伤 | 第11-13页 |
| 1.3 氟离子抑菌或杀菌可能的机制 | 第13-14页 |
| 1.3.1 破坏细胞膜的结构 | 第13页 |
| 1.3.2 影响细胞多种代谢酶的活性 | 第13-14页 |
| 1.4 细菌对氟离子的抗性机制 | 第14-18页 |
| 1.4.1 将无机氟离子转化为有机氟离子的机制 | 第14页 |
| 1.4.2 氟化物核糖开关控制相关蛋白表达 | 第14-17页 |
| 1.4.3 逆向运输蛋白EriC~F对F~-的选择性运输 | 第17-18页 |
| 1.5 前期工作基础 | 第18-19页 |
| 1.6 研究工作的内容及目的 | 第19-20页 |
| 第二章 阴沟肠杆菌E.cloacae FRM基因敲除系统的建立 | 第20-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌株和培养条件 | 第20-21页 |
| 2.1.2 质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 引物 | 第21-22页 |
| 2.1.4 仪器、工具酶、试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基与溶液 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 阴沟肠杆菌E.cloacae FRM卡那霉素抗性缺失突变菌株筛选 | 第23页 |
| 2.2.2 质粒pTargerF的改造 | 第23-26页 |
| 2.2.3 敲除质粒的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 基因敲除 | 第28-30页 |
| 2.2.5 敲除质粒及pCas的消除 | 第30-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.3.1 阴沟肠杆菌E.cloacae FRM菌株改造 | 第32页 |
| 2.3.2 单个基因无痕敲除 | 第32-35页 |
| 2.3.3 多个基因连续敲除 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 氟抗性相关基因的筛选 | 第38-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 菌株 | 第38-39页 |
| 3.1.2 质粒 | 第39页 |
| 3.1.3 引物 | 第39-40页 |
| 3.1.4 仪器、工具酶、试剂及试剂盒 | 第40页 |
| 3.1.5 培养基与溶液 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 氟离子最小抑制浓度(MIC,minimal inhibitory concentration)的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 敲除菌株氟离子抗性平板检测 | 第42页 |
| 3.2.3 片段Is3G、Is3G-1和Is3G-2的敲除 | 第42页 |
| 3.2.4 片段Is3G、Is3G-1和Is3G-2的回补 | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 3.3.1 Is3G片段的敲除导致E.cloacae FRM的高氟抗性消失 | 第43-44页 |
| 3.3.2 片段Is3G上的六个基因共同赋予E. cloacae FRM高氟抗性 | 第44-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47页 |
| 3.5 小结 | 第47-49页 |
| 第四章 氟抗性基因转录分析 | 第49-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 菌株 | 第49页 |
| 4.1.2 引物 | 第49-50页 |
| 4.1.3 仪器、工具酶、试剂及试剂盒 | 第50页 |
| 4.1.4 培养基 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 E.cloacae FRM菌株总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的反转录合成 | 第51-52页 |
| 4.2.3 RT-PCR检测基因的转录 | 第52页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因转录量 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.3.1 六个氟抗性基因通过氟离子核糖体开关受氟离子诱导转录 | 第52-54页 |
| 4.3.2 六个氟抗性基因组成具有两个转录本的基因簇 | 第54-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 4.5 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 个人简历 | 第65-66页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 博士后期间发表的学术论文和重要科研成果 | 第67页 |
