| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 硒蛋白简介 | 第7-9页 |
| 1.1.1 硒蛋白在蛋白质晶体学中的运用 | 第7页 |
| 1.1.2 硒蛋白表达所面临的问题 | 第7-8页 |
| 1.1.3 硒蛋白表达所面临问题的解决策略 | 第8-9页 |
| 1.2 含硫氨基酸 | 第9-13页 |
| 1.2.1 含硫氨基酸的种类及生物学意义 | 第9页 |
| 1.2.2 含硫氨基酸的生物合成途径 | 第9-12页 |
| 1.2.3 含硫氨基酸生物合成途径的差异性 | 第12-13页 |
| 1.3 毕赤酵母细胞作为硒蛋白表达菌株的优势 | 第13-14页 |
| 1.4 研究意义与研究内容 | 第14-15页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第14页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 材料 | 第15-20页 |
| 2.1.1 引物 | 第15页 |
| 2.1.2 质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.3 菌株 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第16-19页 |
| 2.1.5 试剂 | 第19页 |
| 2.1.6 溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 大肠杆菌XL-10 Gold感受态细胞制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 基因检索及蛋白序列比对 | 第21页 |
| 2.2.3 基因敲除模板的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.4 毕赤酵母基因敲除 | 第24-26页 |
| 2.2.5 突变菌株表型验证 | 第26页 |
| 2.2.6 Ppcys3Δ 缺陷型菌株对硒代甲硫氨酸（Se-Met）抗性 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-38页 |
| 3.1 利用生物信息学分析毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径相关基因 | 第27-30页 |
| 3.1.1 毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径相关基因的检索 | 第27-28页 |
| 3.1.2 毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径的模拟构建 | 第28-29页 |
| 3.1.3 毕赤酵母含硫氨基酸生物合成途径相关酶序列比对 | 第29-30页 |
| 3.2 毕赤酵母O-乙酰丝氨酸途径的验证 | 第30-33页 |
| 3.2.1 毕赤酵母PpCYS3基因的敲除 | 第30页 |
| 3.2.2 毕赤酵母Ppcys3Δ 的表型验证 | 第30-31页 |
| 3.2.3 毕赤酵母PpSAT1，PpCYS1基因的敲除 | 第31页 |
| 3.2.4 Ppsat1Δ，Ppcys1Δ，Ppcys3ΔPpsat1Δ，Ppcys3ΔPpcys1Δ 表型的验证 | 第31-32页 |
| 3.2.5 Ppcys3ΔPpcys1Δ 及Ppcys3ΔPpsat1Δ 双缺陷菌株对热敏性的验证 | 第32-33页 |
| 3.3 毕赤酵母O-乙酰同型丝氨酸途径的验证 | 第33-34页 |
| 3.3.1 毕赤酵母PpMET17基因的敲除 | 第33页 |
| 3.3.2 PpMET17缺陷型菌株的表型验证 | 第33-34页 |
| 3.4 毕赤酵母转硫途径的验证 | 第34-36页 |
| 3.4.1 Ppcys3ΔPpmet17Δ 及Ppstr2ΔPpmet17Δ 双缺陷型菌株的构建 | 第34-35页 |
| 3.4.2 Ppcys3ΔPpmet17Δ 及Ppstr2ΔPpmet17Δ 双缺陷型菌株的表型验证 | 第35-36页 |
| 3.5 毕赤酵母cys3Δ 菌株对硒代甲硫氨酸的抗性 | 第36-38页 |
| 3.5.1 毕赤酵母cys3Δ 菌株对硒代甲硫氨酸的抗性 | 第36页 |
| 3.5.2 半胱氨酸对硒代甲硫氨酸毒性的回补 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 附录 | 第45页 |
