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水稻抑草作用关键基因的分子生态机制研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1. 前言第10-18页
   ·水稻化感作用的研究进展第10-13页
     ·植物化感作用第10-11页
     ·水稻化感物质及其分类第11-12页
     ·水稻化感物质的作用机制第12-13页
     ·水稻化感物质的基因调控第13页
   ·PAL(苯丙氨酸解氨酶)基因家族的研究现状第13-16页
     ·苯丙烷代谢途径第13-14页
     ·苯丙氨酸解氨酶PAL 基因家族第14-15页
     ·PAL 与水稻化感作用的潜在联系第15-16页
   ·RNAi 技术及在水稻功能基因方面研究的应用第16-17页
     ·RNA 干扰第16页
     ·RNA 干扰在水稻功能基因方面的研究进展第16-17页
   ·实时荧光量PCR 技术第17页
   ·本研究的目的和意义第17-18页
2 材料与方法第18-25页
   ·材料第18-19页
     ·供试材料第18页
     ·相关引物第18页
     ·RNAi 载体及菌株第18-19页
     ·实验试剂第19页
   ·实验方法第19-25页
     ·供式材料的种植第19页
     ·水稻总RNA 的提取及单链cDNA 的合成第19-20页
     ·水稻RNAi 载体的构建第20页
     ·PAL21-RNAi 转基因水稻的获得第20页
     ·阳性PTCK303+PAL-S-A 转基因干扰植株的筛选第20-21页
     ·稗草胁迫处理转基因水稻与野生型水稻P1312777第21页
     ·水稻酚酸关键酶基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)分析第21-23页
     ·水培液总酚含量测定Folin-Ciocalteu 比色法第23页
     ·HPLC 测定酚酸含量第23-24页
     ·生物测试法(测试水稻化感潜力的变化)第24-25页
3 结果与分析第25-38页
   ·PAL-21 基因片段的克隆及其PAL-21-RNAi 载体的构建第25-26页
   ·PAL-21-RNAi 的菌液PCR 及质粒酶切验证第26页
   ·PAL-21 基因沉默转基因植株的获得第26-27页
   ·转基因水稻GUS 基因、HPT 基因的PCR 验证检测第27页
   ·转基因水稻与野生型水稻PAL-21 基因表达分析第27-28页
   ·转基因水稻与野生型水稻PAL 酶活的测定第28页
   ·qRT-PCR 分析PAL 基因家族各基因成员的表达第28-29页
   ·稗草胁迫下转基因水稻苯丙氨酸代谢关键基因的表达分析第29-30页
   ·稗草胁迫下转基因水稻相对野生型的苯丙氨酸代谢关键基因的表达分析第30-31页
   ·转基因水稻及野生型根系总酚含量测定结果第31-32页
   ·HPLC 分析转基因水稻及野生型酚类物质的含量第32-36页
   ·转基因水稻及野生型根系分泌物的生物测试第36-38页
4 讨论第38-42页
5 问题与展望第42-43页
   ·本研究不足之处第42页
   ·进一步研究的设想第42-43页
参考文献第43-50页
附录1 主要仪器第50-51页
附录2 DH5α 感受态细胞制备及转化第51-52页
附录3 EHA105 根癌农杆菌感受态的制备及转化第52-53页
附录4 水稻 RNA 提取及单链 cDNA 的合成第53-55页
致谢第55页

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