| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 1 我国蜱传病毒研究状况 | 第9-10页 |
| 2 弹状病毒 | 第10-12页 |
| 3 课题研究的目的与意义 | 第12-13页 |
| 第一章 云南省蜱携带病毒的高通量测序及分子流行病学调查 | 第13-27页 |
| 1 实验材料 | 第14-16页 |
| 1.1 标本采集 | 第14-15页 |
| 1.2 实验试剂 | 第15页 |
| 1.3 细胞 | 第15页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-20页 |
| 2.1 RNAseq高通量测序样本的准备 | 第16页 |
| 2.1.1 蜱虫样本的研磨 | 第16页 |
| 2.1.2 蜱虫样本RNA的提取 | 第16页 |
| 2.2 样品的RNAseq高通量测序 | 第16页 |
| 2.3 LS1、LS2、LS3样本c DNA的合成 | 第16-17页 |
| 2.4 分子流行病学调查相关引物的设计 | 第17页 |
| 2.5 蜱虫样本的研磨 | 第17页 |
| 2.6 蜱虫样本RNA的提取 | 第17页 |
| 2.7 cDNA的合成 | 第17页 |
| 2.8 巢式PCR检测YNTV2 | 第17-18页 |
| 2.8.1 巢式PCR | 第18页 |
| 2.8.2 凝胶电泳 | 第18页 |
| 2.9 YNTV2的分离 | 第18-20页 |
| 2.9.1 细胞培养方法 | 第18-19页 |
| 2.9.2 BHK-21 和Vero-E6细胞分离病毒 | 第19页 |
| 2.9.3 感染细胞样本的检测 | 第19-20页 |
| 2.10 统计学方法 | 第20页 |
| 3 结果与分析 | 第20-25页 |
| 3.1 云南蜱样本RNA-seq高通量测序结果 | 第20-21页 |
| 3.2 YNTV2分子流行病学调查 | 第21-25页 |
| 3.3 组织细胞培养方法分离YNTV2的结果 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 第二章 云南省蜱携带YNTV2基因组序列的扩增及遗传进化分析 | 第27-41页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| 1.1 样本 | 第27页 |
| 1.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 1.2.1 试剂 | 第27-28页 |
| 1.2.2 菌株和质粒 | 第28页 |
| 1.2.3 细菌培养基 | 第28页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.1 序列的拼接与分析 | 第28-30页 |
| 2.2 蜱虫样本的研磨 | 第30页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第30页 |
| 2.4 高保真酶巢式PCR反应 | 第30页 |
| 2.5 凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.6 PCR产物回收与+A | 第30-31页 |
| 2.7 分子克隆 | 第31-33页 |
| 2.7.1 LB液体培养基和LB固体培养基的制备 | 第31页 |
| 2.7.2 感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.7.3 酶连反应 | 第32页 |
| 2.7.4 电转 | 第32-33页 |
| 2.8 菌落PCR检测 | 第33页 |
| 2.9 菌株保存与送测序 | 第33页 |
| 2.10 生物信息学方法 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 3.1 YNTV2 RNA-seq测序结果分析 | 第33-34页 |
| 3.2 YNTV2部分序列巢式PCR的结果 | 第34页 |
| 3.3 YNTV2序列的拼接结果 | 第34-37页 |
| 3.4 YNTV2基于RNA聚合酶（RdRp）氨基酸序列的系统进化分析 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 YNTV2核衣壳蛋白的原核表达及抗体的制备 | 第41-50页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 实验样本 | 第41页 |
| 1.2 菌株及限制性内切酶 | 第41页 |
| 1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 1.4 实验主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-46页 |
| 2.1 主要缓冲液的配制方法 | 第42页 |
| 2.2 扩增YNTV2 NP核酸序列引物的设计 | 第42页 |
| 2.3 YNTV2 NP目的基因的获得 | 第42-43页 |
| 2.4 YNTV2 NP蛋白重组表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 2.5 YNTV2 NP蛋白的原核表达 | 第44-45页 |
| 2.6 原核表达YNTV2 NP蛋白的大量诱导及纯化 | 第45-46页 |
| 2.7 原核表达YNTV2 NP抗体的制备 | 第46页 |
| 2.8 制备的YNTV2 NP抗体的检测 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-48页 |
| 3.1 YNTV2重组NP蛋白原核表达的结果 | 第46-47页 |
| 3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测重组NP蛋白兔多克隆抗体 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 综述 | 第55-64页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
