| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-15页 |
| 绪论 | 第15-16页 |
| 研究背景和意义 | 第15-16页 |
| 第一章 基因的克隆、表达质粒的构建和转染 | 第16-35页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 实验材料 | 第16-17页 |
| 1.2.1 实验仪器与器皿 | 第16-17页 |
| 1.2.2 试剂和细胞 | 第17页 |
| 1.3 实验方法 | 第17-30页 |
| 1.3.1 构建重组质粒pIPF | 第17-23页 |
| 1.3.2 构建重组质粒pINH | 第23-26页 |
| 1.3.3 细胞的培养 | 第26页 |
| 1.3.4 重组质粒pIPF和pINH的单独转染 | 第26-27页 |
| 1.3.5 重组质粒pIRL的稳定转染 | 第27-28页 |
| 1.3.6 裂解细胞提取蛋白 | 第28页 |
| 1.3.7 测定蛋白含量 | 第28-29页 |
| 1.3.8 SDS-PAGE | 第29页 |
| 1.3.9 Western Blot检测目的蛋白 | 第29-30页 |
| 1.4 结果 | 第30-33页 |
| 1.4.1 PCR扩增PTEN-FLAG和NUAK1-HIS基因 | 第30-31页 |
| 1.4.2 pIPF和pINH重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| 1.4.3 PTEN-FLAG和NUAK1-HIS片段的测序结果 | 第31-32页 |
| 1.4.4 稳定细胞系的荧光图 | 第32页 |
| 1.4.5 Western Blot检测单独表达的三种目的蛋白 | 第32-33页 |
| 1.5 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 NUAK1和PTEN的相互作用及LKB1对PTEN的磷酸化影响 | 第35-45页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.2.1 实验仪器与器皿 | 第35-36页 |
| 2.2.2 试剂 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-40页 |
| 2.3.1 共转染 | 第36-37页 |
| 2.3.2 裂解细胞提取总蛋白 | 第37页 |
| 2.3.3 Western Blot检测目的蛋白 | 第37页 |
| 2.3.4 IP和co-IP | 第37-38页 |
| 2.3.5 亚细胞组分的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.6 LKB1对PTEN磷酸化水平的影响 | 第39页 |
| 2.3.7 LKB1对PTEN磷酸酶活性的影响 | 第39-40页 |
| 2.4 结果 | 第40-43页 |
| 2.4.1 Western Blot检测PTEN-FLAG和NUAK1-HIS的免疫共沉淀及其细胞内定位情况 | 第40-41页 |
| 2.4.2 LKB1通过NUAK1提高PTEN的磷酸化水平 | 第41-42页 |
| 2.4.3 LKB1通过NUAK1增强PTEN的磷酸酶活性 | 第42-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 附录1 NUAK1-HIS的测序结果比对图 | 第50-52页 |
| 附录2 PTEN-FLAG的测序结果比对图 | 第52-53页 |
