中文摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-12页 |
英文缩略词表 | 第13-15页 |
1 前言 | 第15-17页 |
2 材料与方法 | 第17-34页 |
2.1 主要实验仪器和试剂材料 | 第17-19页 |
2.1.1 主要实验仪器 | 第17-18页 |
2.1.2 主要试剂与材料 | 第18-19页 |
2.2 实验标本的采集和分组 | 第19-22页 |
2.2.1 皮肤与瘢痕标本的纳入标准和排除标准 | 第19-20页 |
2.2.2 瘢痕标本的采集 | 第20-21页 |
2.2.3 瘢痕标本的相关资料 | 第21页 |
2.2.4 骨髓标本的采集 | 第21-22页 |
2.2.5 骨髓标本的相关资料 | 第22页 |
2.3 成纤维细胞及骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 | 第22-26页 |
2.3.1 瘢痕或皮肤成纤维细胞的分离与培养 | 第22-23页 |
2.3.2 人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的分离与培养 | 第23-24页 |
2.3.3 hBMSCs的成骨、成脂分化鉴定 | 第24-25页 |
2.3.4 hBMSCs的干细胞标志物表达鉴定 | 第25-26页 |
2.4 各类条件培养基的收集与制备 | 第26-27页 |
2.4.1 条件培养基的分组 | 第26页 |
2.4.2 PBS条件培养基的配制 | 第26页 |
2.4.3 正常皮肤成纤维细胞条件培养基的配制 | 第26页 |
2.4.4 骨髓间充质干细胞条件培养基的配制 | 第26-27页 |
2.5 成纤维细胞的条件培养基处理方案 | 第27页 |
2.6 细胞增殖实验(CCK-8法) | 第27-28页 |
2.7 细胞凋亡染色实验(TUNEL染色) | 第28页 |
2.8 羟脯氨酸含量测定 | 第28-29页 |
2.9 细胞免疫印迹实验(In-cell western blot) | 第29-31页 |
2.10 细胞免疫荧光染色 | 第31-32页 |
2.11 TRIzol法总RNA的提取和定量 | 第32-33页 |
2.12 实时定量PCR | 第33-34页 |
2.13 数据统计分析 | 第34页 |
3 结果 | 第34-38页 |
3.1 hBMSCs的鉴定结果 | 第34-35页 |
3.2 hBMSC条件培养基抑制HSFs和KFs增殖 | 第35页 |
3.3 hBMSC条件培养基不影响HSFs和KFs凋亡 | 第35-36页 |
3.4 hBMSC条件培养基减慢HSFs和KFs迁移 | 第36页 |
3.5 hBMSC条件培养基抑制促纤维化表型相关基因和蛋白在HSFs和KFs内的表达 | 第36-37页 |
3.6 hBMSC条件培养基促进抗纤维化表型相关基因和蛋白在HSFs和KFs内的表达 | 第37页 |
3.7 hBMSC条件培养基抑制HSFs和KFs合成细胞外基质 | 第37-38页 |
4 讨论 | 第38-43页 |
5 结论 | 第43页 |
6 意义 | 第43-45页 |
附表 | 第45-51页 |
附图 | 第51-63页 |
参考文献 | 第63-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
攻读博士期间发表的文章 | 第74-75页 |
外文论文 | 第75-100页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第100页 |