| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写词表(abbreviations) | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| ·细菌多组分单加氧酶 | 第15-19页 |
| ·羟化酶组分 | 第15-16页 |
| ·调节蛋白组分 | 第16页 |
| ·还原酶组分 | 第16-19页 |
| ·苯酚羟化酶 | 第19-23页 |
| ·污染物苯酚的生物降解 | 第19页 |
| ·多组分苯酚羟化酶 | 第19-20页 |
| ·嗜酸硫化芽孢杆菌的多组分苯酚羟化酶 | 第20-23页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第23页 |
| ·本论文研究总体方案 | 第23-25页 |
| 第二章 嗜酸硫化芽孢杆菌TPY苯酚羟化酶还原酶组分的序列分析 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-32页 |
| ·MhpP具有N-端植物型ferredoxin结构域和C端FNR结构域 | 第26-30页 |
| ·S.a TPY的苯酚羟化酶还原酶MhpP氨基酸序列具有新颖性 | 第30-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 苯酚羟化酶还原酶组分的重组表达与辅基鉴定 | 第33-51页 |
| ·实验材料 | 第33-37页 |
| ·菌种与质粒 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·试剂盒 | 第34页 |
| ·工具酶和相关试剂 | 第34-35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·主要溶液 | 第35-37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-45页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增体系与条件 | 第38页 |
| ·切胶回收DNA片段 | 第38-39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·转化 | 第39-40页 |
| ·质粒小量提取 | 第40页 |
| ·酶切反应 | 第40-41页 |
| ·菌落PCR | 第41页 |
| ·原核表达重组子的构建 | 第41页 |
| ·重组质粒提取，方法同 2.2.7 | 第41页 |
| ·重组质粒转化 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的表达纯化（可溶蛋白） | 第42页 |
| ·蛋白的透析除盐 | 第42-43页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第43-44页 |
| ·紫外-可见光光谱扫描法（UV-vis spectroscopy）检测 | 第44页 |
| ·黄素辅基分离与鉴定 | 第44-45页 |
| ·电子顺磁共振（EPR）扫描 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·mhpP基因的扩增与表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的辅基鉴定 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 苯酚羟化酶还原酶组分的功能鉴定与酶活测定 | 第51-59页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·样品与试剂 | 第51-52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·蛋白MhpP对NADPH的催化 | 第52页 |
| ·蛋白MhpP对几种电子受体的催化 | 第52-53页 |
| ·蛋白MhpP对两种电子供体NADH和NADPH的选择性 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-57页 |
| ·蛋白MhpP对NADPH表现出催化活性 | 第53-54页 |
| ·蛋白MhpP对三种电子受体具有催化活性 | 第54-57页 |
| ·蛋白MhpP对NADPH具有偏好型 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第五章 苯酚羟化酶还原酶组分的定点突变 | 第59-66页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·引物合成 | 第59页 |
| ·工具酶 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·定点突变 | 第60-61页 |
| ·菌落PCR初筛阳性克隆 | 第61页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-65页 |
| ·定点突变PCR扩增 | 第62页 |
| ·突变蛋白的表达纯化 | 第62-63页 |
| ·突变蛋白的光谱扫描与EPR扫描 | 第63-64页 |
| ·突变蛋白的活性检测 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 结语 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 主要研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附件：专利申请书 | 第75页 |
