| 第一部分 甘草NCED4基因植物表达载体构建方法研究 | 第1-66页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述及本论文研究思路 | 第15-23页 |
| 1 文献综述 | 第15-20页 |
| ·脱落酸生物合成途径及NCED基因家族研究进展 | 第15-17页 |
| ·表达载体构建方法研究进展 | 第17-20页 |
| 2 研究思路与方法 | 第20-23页 |
| ·研究目标 | 第20页 |
| ·研究内容 | 第20-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 烟草TobRB7启动子的克隆 | 第23-29页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第23页 |
| ·植物材料、菌株及质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器与耗材 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-26页 |
| ·总DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·胶回收纯化 | 第25页 |
| ·与克隆载体连接 | 第25-26页 |
| ·转化感受态细胞及阳性克隆筛选 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| 3 实验结果 | 第26-28页 |
| 4 小结与讨论 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 基因融合法表达载体的构建 | 第29-40页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第29页 |
| ·菌株及质粒 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·仪器与耗材 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-34页 |
| ·载体构建原理 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·质粒提取 | 第31页 |
| ·带酶切位点及连接位点的基因片段克隆 | 第31-32页 |
| ·载体pCAMBIA1305.1双酶切 | 第32页 |
| ·基因融合 | 第32-33页 |
| ·基因重组 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选及PCR验证 | 第34页 |
| ·测序及测序结果分析 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-38页 |
| ·带酶切位点及连接位点的基因片段的克隆结果 | 第34-35页 |
| ·载体pCAMBIA1305.1双酶切结果 | 第35页 |
| ·基因融合结果 | 第35-36页 |
| ·重组载体阳性克隆筛选结果 | 第36-37页 |
| ·基因重组结果 | 第37-38页 |
| 4 小结与讨论 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 多片段一步克隆法表达载体的构建 | 第40-44页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-42页 |
| ·重组载体阳性克隆筛选结果 | 第40-41页 |
| ·基因重组结果 | 第41-42页 |
| 4 小结与讨论 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 根特异性通用表达载体的构建 | 第44-50页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-46页 |
| ·载体构建原理 | 第44页 |
| ·质粒提取 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·带酶切位点及连接位点的基因片段克隆 | 第45页 |
| ·载体pCAMBIA1305.1双酶切 | 第45-46页 |
| ·根特异性通用表达载体pCA-TobRB7的双酶切 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-48页 |
| ·pCA-TobRB7根特异性通用表达载体的构建结果 | 第46-47页 |
| ·pCA-TobRB7-NCED4-3根特异性通用表达载体的构建结果 | 第47-48页 |
| 4 小结与讨论 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 甘草根特异性表达工程菌的构建 | 第50-52页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第50页 |
| ·菌株及质粒 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·仪器与耗材 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-51页 |
| ·根特异性重组质粒的提取 | 第50页 |
| ·根特异性重组质粒转化农杆菌 | 第50页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 第七章 根特异性过表达NCED4基因甘草愈伤组织的培养 | 第52-59页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·试剂、仪器、耗材 | 第52页 |
| 2. 培养基及溶液配制 | 第52-54页 |
| ·6,7V培养基配方 | 第52-54页 |
| ·其他试剂及母液 | 第54页 |
| 3. 实验方法 | 第54-55页 |
| ·根癌农杆菌工程菌的活化 | 第54页 |
| ·甘草外植体材料的制备 | 第54-55页 |
| ·侵染、共培养、除菌及愈伤组织的诱导 | 第55页 |
| 4. 实验结果 | 第55-58页 |
| ·根癌农杆菌工程菌的活化 | 第55页 |
| ·甘草外植体材料的制备 | 第55-56页 |
| ·侵染、共培养及除菌 | 第56-58页 |
| 5. 小结与讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第八章 总结和展望 | 第59-62页 |
| 1 总结 | 第59-60页 |
| 2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 第二部分：基于甘草β-AS基因内含子多态性的高甘草酸含量分子标记研究 | 第66-121页 |
| 摘要 | 第66-68页 |
| ABSTRACT | 第68-70页 |
| 符号说明 | 第70页 |
| 前言 | 第70-72页 |
| 第九章 文献综述及本论文研究思路 | 第72-81页 |
| 1. 文献综述 | 第72-79页 |
| ·分子标记与药用植物有效成分含量的相关性研究进展 | 第72-75页 |
| ·甘草中甘草酸含量差异现状的研究进展 | 第75-77页 |
| ·甘草酸生物合成途径及β-AS基因多态性研究进展 | 第77-79页 |
| 2. 研究思路与方法 | 第79-81页 |
| ·研究目标 | 第79页 |
| ·研究内容 | 第79页 |
| ·研究方案 | 第79-80页 |
| ·技术路线 | 第80-81页 |
| 第十章 甘草β-AS基因内含子多态性的检测及分析 | 第81-89页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第81-82页 |
| ·植物材料 | 第81页 |
| ·试剂 | 第81页 |
| ·仪器和耗材 | 第81-82页 |
| 2 实验方法 | 第82-84页 |
| ·总DNA提取 | 第82页 |
| ·甘草β-AS基因内含子分片段引物设计 | 第82-83页 |
| ·PCR反应体系 | 第83页 |
| ·PCR反应条件 | 第83-84页 |
| ·序列校对拼接 | 第84页 |
| ·甘草β-AS基因内含子多态性分析 | 第84页 |
| 3 实验结果 | 第84-87页 |
| ·甘草β-AS基因内含子片段的PCR结果 | 第84-85页 |
| ·β-AS基因内含子测序及BLAST结果 | 第85-87页 |
| ·甘草β-AS基因内含子多态性分析 | 第87页 |
| 4 小结与讨论 | 第87-89页 |
| ·小结 | 第87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第十一章 甘草β-AS基因内含子与高甘草酸含量相关的分子标记研究 | 第89-113页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第89页 |
| ·植物材料 | 第89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·仪器和耗材 | 第89页 |
| 2 实验方法 | 第89-91页 |
| ·甘草样本甘草酸HPLC法含量测定 | 第89-90页 |
| ·甘草β-AS基因各变异位点与甘草酸含量的关联分析 | 第90页 |
| ·甘草β-AS基因单倍型与甘草酸含量的相关性分析 | 第90-91页 |
| 3 实验结果 | 第91-110页 |
| ·甘草酸含量测定结果 | 第91-100页 |
| ·甘草β-AS基因各变异位点与甘草酸含量的关联分析结果 | 第100-106页 |
| ·甘草β-AS基因单倍型与甘草酸含量的相关性分析结果 | 第106-110页 |
| 4 小结与讨论 | 第110-113页 |
| ·小结 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| 第十二章 总结和展望 | 第113-116页 |
| 1 总结 | 第113-114页 |
| 2 展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 个人简历 | 第123-124页 |
