| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 英文缩写词 | 第16-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-32页 |
| ·研究背景 | 第18页 |
| ·本课题研究内容 | 第18-19页 |
| ·研究目的 | 第19页 |
| ·对食管癌的认识 | 第19-26页 |
| ·肿瘤细胞概述 | 第19-20页 |
| ·致癌因素 | 第20页 |
| ·食管概述 | 第20-22页 |
| ·食管癌流行病学特点 | 第22-23页 |
| ·发病特点 | 第23页 |
| ·死亡原因、病理分期 | 第23-24页 |
| ·组织学类型和分级 | 第24-25页 |
| ·食管癌转移 | 第25页 |
| ·食管癌诊断 | 第25页 |
| ·食管癌治疗 | 第25-26页 |
| ·microRNA简介 | 第26-32页 |
| ·microRNA的组织器官分布谱 | 第27页 |
| ·循环系统中的microRNA | 第27-28页 |
| ·肿瘤诊断和治疗中的microRNA | 第28页 |
| ·microRNA的测定 | 第28-29页 |
| ·microRNA的产生 | 第29-30页 |
| ·microRNA作用的方式和特点 | 第30-32页 |
| 第2章 总体实验方案 | 第32-42页 |
| ·流程图 | 第32-33页 |
| ·选择论证 | 第33-34页 |
| ·miR-100简介 | 第34-37页 |
| ·CXCR7简介 | 第37页 |
| ·FGFR3简介 | 第37-38页 |
| ·选择CXCR7和FGFR3原因分析 | 第38-40页 |
| ·统计学方法 | 第40-42页 |
| 第3章 miR-100对食管癌细胞的作用 | 第42-82页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·研究方法 | 第44页 |
| ·细胞培养 | 第44-46页 |
| ·细胞传代 | 第44-45页 |
| ·细胞冻存 | 第45页 |
| ·细胞复苏 | 第45页 |
| ·细胞计数 | 第45-46页 |
| ·pcDNA6.2-GW/ EmGFP-miR-100载体构建 | 第46-58页 |
| ·插入片段的miRNA设计 | 第46页 |
| ·合成两条单链miRNA | 第46-47页 |
| ·双链退火与连接 | 第47-48页 |
| ·CaCl2制备大肠杆菌感受态TOP10菌株 | 第48页 |
| ·转化 | 第48页 |
| ·质粒提取 | 第48-49页 |
| ·酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·脂质体转染miR-100表达质粒 | 第50页 |
| ·建立稳定表达miR-100的细胞株 | 第50-51页 |
| ·提取总RNA检测miR-100表达量 | 第51-52页 |
| ·DNA酶消化 | 第52-53页 |
| ·RNA的纯度与浓度鉴定 | 第53-54页 |
| ·mi R-100的SYBR Green qRT-PCR检测 | 第54-56页 |
| ·质粒中提 | 第56-58页 |
| ·mRNA表达谱分析 | 第58页 |
| ·细胞生物学特性的改变 | 第58-64页 |
| ·细胞增殖实验 | 第58-59页 |
| ·细胞凋亡 | 第59-60页 |
| ·细胞周期 | 第60-61页 |
| ·细胞迁移实验 | 第61-62页 |
| ·细胞侵袭实验 | 第62页 |
| ·软琼脂克隆实验 | 第62-63页 |
| ·裸鼠荷瘤实验 | 第63-64页 |
| ·实验结果 | 第64-76页 |
| ·细胞形态学观察 | 第64页 |
| ·表达载体构建完成 | 第64页 |
| ·转染细胞 | 第64-65页 |
| ·miR-100含量变化（qRT-PCR检测） | 第65-66页 |
| ·镜下细胞形态学变化 | 第66-67页 |
| ·细胞增殖实验 | 第67页 |
| ·细胞凋亡 | 第67-69页 |
| ·细胞周期 | 第69页 |
| ·细胞划痕实验 | 第69-72页 |
| ·细胞迁移实验 | 第72-73页 |
| ·细胞侵袭实验 | 第73页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第73-75页 |
| ·裸鼠荷瘤实验 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-82页 |
| ·细胞形态学变化 | 第77-78页 |
| ·细胞增殖、凋亡、周期实验 | 第78页 |
| ·细胞迁移、侵袭实验 | 第78-79页 |
| ·细胞群体迁移－掉落细胞 | 第79页 |
| ·总结 | 第79-82页 |
| 第4章 miR-100靶点研究 | 第82-116页 |
| ·实验耗材、使用的技术、配制的试剂 | 第82-86页 |
| ·pmiRGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression载体构建 | 第86-90页 |
| ·Trizol法提取基因组DNA | 第86-87页 |
| ·PCR方法获得CXCR7和FGFR3的 3’UTR | 第87-89页 |
| ·重组质粒连接并转化 | 第89-90页 |
| ·鉴定及测序 | 第90页 |
| ·脂质体共转染 | 第90-91页 |
| ·Luciferase报告基因检测技术 | 第91-94页 |
| ·qRT-PCR检测CXCR7、FGFR3、miR-100表达量变化 | 第94-98页 |
| ·引物设计 | 第94页 |
| ·分别提取细胞内大于和小于 200nt的RNA | 第94-96页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第96-97页 |
| ·SYBR Green qRT-PCR法的第二步（PCR和实时荧光检测） | 第97-98页 |
| ·Western Blot实验 | 第98-102页 |
| ·蛋白抽提 | 第98-100页 |
| ·蛋白定量 | 第100页 |
| ·制备SDS-PAGE的电泳胶 | 第100-101页 |
| ·蛋白电泳 | 第101-102页 |
| ·蛋白转膜 | 第102页 |
| ·抗体免疫标记 | 第102页 |
| ·实验结果 | 第102-107页 |
| ·载体构建情况 | 第102-103页 |
| ·qRT-PCR检测CXCR7/FGFR3 mRNA表达变化 | 第103页 |
| ·蛋白免疫印记结果 | 第103页 |
| ·荧光素酶基因报告系统检测结果 | 第103-107页 |
| ·讨论 | 第107-110页 |
| ·microRNA对靶蛋白抑制的检验 | 第107页 |
| ·扩增中杂带问题 | 第107-108页 |
| ·荧光素酶基因报告系统的实验结果分析 | 第108-110页 |
| ·综合分析 | 第110-113页 |
| ·展望 | 第113-116页 |
| 结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-128页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
