| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| ·果胶酶的概述 | 第11-16页 |
| ·果胶酶分类及作用机理 | 第11-13页 |
| ·碱性果胶酶及其应用 | 第13-15页 |
| ·果胶解聚酶的5个家族 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| ·碱性果胶酶的国内外研究进展 | 第17-18页 |
| ·国外研究进展 | 第17页 |
| ·国内研究进展 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| ·本试验的内容 | 第19-21页 |
| 2 产碱性果胶酶菌株的筛选及鉴定 | 第21-34页 |
| ·实验材料与仪器 | 第21-22页 |
| ·菌种来源 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·仪器与设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·产果胶酶菌种的初步筛选分离 | 第22页 |
| ·DNS法对果胶酶活力的测定 | 第22-23页 |
| ·所筛菌株形态学及生理生化鉴定 | 第23页 |
| ·所筛菌株基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·所筛菌株16S rDNA鉴定 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-33页 |
| ·产碱性果胶酶菌种的分离与初步筛选 | 第24-26页 |
| ·碱性果胶酶活力的定量测定 | 第26-27页 |
| ·IE1、IE3和IF7形态学及生理生化鉴定 | 第27-29页 |
| ·IE1、IE3和IF7菌株分子生物学鉴定 | 第29-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 3 TAIL-PCR法克隆果胶解聚酶基因全长 | 第34-57页 |
| ·实验材料与仪器 | 第34-35页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·仪器与设备 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·IE1、IE3和IF7菌株基因组DNA的提取及纯化 | 第35页 |
| ·果胶解聚酶基因保守区片段的克隆 | 第35-36页 |
| ·利用TAIL-PCR克隆果胶解聚酶基因全长 | 第36-38页 |
| ·电泳、测序与分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-56页 |
| ·果胶解聚酶基因保守区片段的克隆 | 第38-42页 |
| ·果胶解聚酶基因全长的克隆结果 | 第42-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 4 IF7碱性果胶裂解酶基因在E.coli中的异源表达 | 第57-68页 |
| ·实验材料与仪器 | 第57-58页 |
| ·菌种与质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·仪器与设备 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| ·扩增果胶裂解酶pel-Bs1F7基因片段 | 第58-59页 |
| ·果胶裂解酶pel-Bs1F7基因与表达载体连接 | 第59-60页 |
| ·重组载体转入表达感受态以及阳性克隆子筛选 | 第60页 |
| ·诱导时间和诱导温度对重组果胶酶pel-Bs1 F7的影响 | 第60页 |
| ·IE1、IE3、IF7果胶裂解酶的三级蛋白结构分析 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-67页 |
| ·果胶裂解酶基因全长扩增的电泳结果 | 第61页 |
| ·重组质粒pET22b(+)/pelBs1F7的筛选 | 第61-62页 |
| ·重组菌E.coli BL21/pET-pel-Bs1 F7阳性克隆子的筛选 | 第62-63页 |
| ·诱导时间和诱导温度对果胶酶pel-Bs1 F7表达的影响 | 第63-64页 |
| ·碱性果胶裂解酶pel-Bs1 F7的3级结构分析 | 第64-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 5 重组碱性果胶裂解酶pel-Bs1F7酶学性质的研究 | 第68-75页 |
| ·实验材料与仪器 | 第68-69页 |
| ·菌种 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·仪器与设备 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·菌种的活化与扩大培养 | 第69页 |
| ·重组果胶酶pel-Bs1 F7纯化 | 第69页 |
| ·重组果胶酶pel-Bs1 F7的SDS-PAGE分析 | 第69页 |
| ·重组果胶酶pel-Bs1 F7的酶活测定 | 第69页 |
| ·蛋白含量测定 | 第69-70页 |
| ·重组果胶酶pel-Bs1F7的酶学性质分析 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-74页 |
| ·重组果胶酶比活力的测定结果 | 第71页 |
| ·pH对重组果胶酶活力的影响 | 第71-72页 |
| ·温度对重组果胶酶活力的影响 | 第72-73页 |
| ·金属离子对重组果胶酶活力的影响 | 第73-74页 |
| ·重组果胶酶的蛋白酶抗性 | 第74页 |
| ·重组果胶酶的动力学分析 | 第74页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
