| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 符号表 | 第7-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第11-21页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征及其危害 | 第11页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的病原学 | 第11-12页 |
| ·GP5 蛋白 | 第12-14页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的流行病学 | 第14页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的临床症状 | 第14-15页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的病理学 | 第15页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的致病机理 | 第15-16页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的诊断 | 第16-17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的防制 | 第17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的疫苗 | 第17-21页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌防治及载体研究进展 | 第21-23页 |
| ·猪霍乱沙门氏病及防治 | 第21页 |
| ·减毒沙门氏菌载体研究进展 | 第21-23页 |
| 第2章 PRRSV ORF5基因原核表达载体的构建及优化表达 | 第23-36页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·实验所用的主要试剂及酶 | 第23-24页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24页 |
| ·本研究中所用到的引物 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·菌种复苏 | 第25页 |
| ·小量质粒的提取 | 第25页 |
| ·目的基因片段的酶切 | 第25-26页 |
| ·目的基因产物的回收和纯化 | 第26页 |
| ·目的基因产物与pET28a载体的连接 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第27页 |
| ·重组菌的鉴定 | 第27-28页 |
| ·外源基因在重组菌中的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·不同诱导条件对目的蛋白表达量的影响 | 第29页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第29页 |
| ·包涵体的提取和纯化及浓度测定 | 第29-30页 |
| ·包涵体的复性 | 第30页 |
| ·表达产物的特异性检测 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·原核表达载体pET28a-dORF5的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组GP5蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·IPTG浓度对PRRSV GP5蛋白表达含量的影响 | 第32页 |
| ·诱导时间对重组GP5蛋白表达量的影响 | 第32-33页 |
| ·GP5蛋白的纯化及复性 | 第33页 |
| ·重组GP5 蛋白的Western blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 重组PRRSV ORF5基因减毒猪霍乱沙门氏菌C78-1生物学特性研究 | 第36-47页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·菌株、试剂 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37页 |
| ·主要实验器材 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·重组菌株 crp asdC78-1(pYA-dORF5)的表型及生化特性鉴定 | 第38页 |
| ·重组菌株 crp asdC78-1(pYA-dORF5)生长特性 | 第38页 |
| ·dORF5基因在重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)稳定性检测 | 第38页 |
| ·重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)的分泌表达 | 第38页 |
| ·重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)对小鼠的安全性试验 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)表型性状及生化特性 | 第39-40页 |
| ·重组菌株ΔcrpΔasdC78-1(pYA-dORF5)生长特性 | 第40-41页 |
| ·dORF5基因在 crp asd C78-1(pYA-dORF5)中的稳定性鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)的分泌表达 | 第42-43页 |
| ·重组菌株 crp asd C78-1(pYA-dORF5)的毒力实验测定结果 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 第4章 重组PRRSV ORF5基因减毒猪霍乱沙门氏菌C78-1对小鼠免疫学特性研究 | 第47-61页 |
| ·材料 | 第47-49页 |
| ·菌株和试剂 | 第47-48页 |
| ·主要试剂的配置 | 第48页 |
| ·实验动物 | 第48页 |
| ·主要实验器材 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·实验小鼠口服重组菌株后在体内的分布及定植情况 | 第49页 |
| ·ELISA抗原的制备 | 第49页 |
| ·间接检测小鼠血清抗体的ELISA法的步骤 | 第49-50页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第50页 |
| ·重组菌株 crp asdC78-1(pYA-dORF5)对小鼠的免疫试验 | 第50页 |
| ·免疫小鼠的血清IgG抗体的检测 | 第50-51页 |
| ·免疫小鼠的淋巴细胞转化实验 | 第51页 |
| ·黏膜免疫ELISA试剂盒检测小鼠肠粘膜SIgA抗体 | 第51页 |
| ·统计学分析 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-58页 |
| ·重组菌株 crp asdC78-1(pYA-dORF5)口服后在小鼠体内的分布 | 第52页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定结果 | 第52-54页 |
| ·间接ELISA检测免疫小鼠血清IgG抗体 | 第54-57页 |
| ·免疫小鼠淋巴细胞转化实验 | 第57页 |
| ·肠道分泌性总SIgA抗体检测结果 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 第5章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第71页 |
