| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-13页 |
| ·MRP | 第8-9页 |
| ·MRPS18 | 第9页 |
| ·微环 DNA 载体 | 第9-11页 |
| ·微环 DNA 的结构 | 第10页 |
| ·微环 DNA 的产生 | 第10-11页 |
| ·微环表达载体的优点 | 第11页 |
| ·细胞永生化的检测 | 第11-12页 |
| ·展望 | 第12-13页 |
| 2 引言 | 第13-14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-23页 |
| ·样品采集 | 第14页 |
| ·菌株和质粒 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·主要试剂及配制 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌 DH5a 和 ZYCY10P3S2T E.coli 感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第15页 |
| ·试验方法 | 第15-23页 |
| ·猪 MRPS18 基因克隆与组织分布 | 第15-17页 |
| ·pMD19-T-MRPS18 重组质粒构建 | 第17-18页 |
| ·Minicircle-MRPS18 重组表达质粒构建 | 第18-19页 |
| ·重组质粒转染 Hela 细胞 | 第19-23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-32页 |
| ·猪 MRPS18 基因的克隆 | 第23页 |
| ·猪 MRPS18 基因序列分析 | 第23-24页 |
| ·猪 MRPS18 基因的组织分布 | 第24页 |
| ·pMD19-T-MRPS18 重组质粒构建 | 第24-25页 |
| ·pMD19-T-MRPS18 重组质粒的酶切 | 第25页 |
| ·Minicircle 质粒的酶切 | 第25-26页 |
| ·重组表达质粒 Minicircle-MRPS18 的构建 | 第26页 |
| ·重组表达质粒 Minicircle-MRPS18 的诱导 | 第26-27页 |
| ·重组质粒转染 Hela 细胞 | 第27-32页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 MRPS18 基因在 Hela 细胞中的表达 | 第27页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 GFP 基因在 Hela 细胞中表达 | 第27-28页 |
| ·荧光持续时间观察 | 第28页 |
| ·MTT 法细胞生长曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·β-半乳糖苷酶报告基因检测 | 第29-30页 |
| ·免疫化学实验检测细胞中 TERT 的表达情况 | 第30-31页 |
| ·端粒酶活性的检测 | 第31-32页 |
| 5 结论与讨论 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| ABSTRACT | 第37页 |
