| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词对照表 | 第6-11页 |
| 1 引言(导论) | 第11-18页 |
| ·CD14的分子结构 | 第11页 |
| ·CD14的分布 | 第11-12页 |
| ·CD14与细胞信号转导 | 第12页 |
| ·CD14与疾病 | 第12-15页 |
| ·布鲁氏菌病 | 第13-15页 |
| ·AL1/ARDS | 第15页 |
| ·RNA干扰 | 第15-16页 |
| ·目前存在的问题 | 第16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16-17页 |
| ·研究内容及技术路线 | 第17-18页 |
| ·具体研究内容 | 第17页 |
| ·实验技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-36页 |
| ·主要材料 | 第18-23页 |
| ·细胞 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·引物的设计与合成 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·常用试剂配制方法 | 第20-23页 |
| ·细胞培养相关试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·RNA电泳相关试剂的配制 | 第21页 |
| ·Western Blot所需溶液的配制 | 第21-23页 |
| ·LPS储备液的制备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·RAW264.7细胞的培养 | 第23-24页 |
| ·四条siRNA干扰序列的设计与化学合成 | 第24页 |
| ·siRNA转染RAW264.7细胞条件的优化 | 第24-26页 |
| ·转染试剂使用浓度的优化 | 第24-25页 |
| ·siRNA最适使用浓度的优化 | 第25页 |
| ·siRNA干扰时间的优化 | 第25-26页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第26页 |
| ·最适干扰CD14表达siRNA的筛选 | 第26-32页 |
| ·RAW264.7细胞转染 | 第26-27页 |
| ·RT-qPCR检测CD14 mRNA转录水平 | 第27-29页 |
| ·Western blot检测CD14蛋白表达 | 第29-32页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞的条件优化 | 第32-33页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞时间的确定 | 第33页 |
| ·CD14表达缺陷型RAW264.7细胞的构建 | 第33-34页 |
| ·CD14表达缺陷型RAW264.7细胞炎症模型的建立 | 第34页 |
| ·ELISA法检测细胞培养上清中细胞炎症因子的分泌 | 第34-36页 |
| ·细胞培养上清中TNF-a的检测 | 第34-35页 |
| ·细胞培养上清中IL-6的检测 | 第35-36页 |
| ·细胞培养上清中MIP-2的检测 | 第36页 |
| ·细胞培养上清中NO的检测 | 第36页 |
| ·统计学方法 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-49页 |
| ·RAW264.7细胞转染条件的优化结果 | 第36页 |
| ·siRNAs可有效降低CD14 mRNA的表达水平 | 第36-37页 |
| ·siRNAs可有效降低CD14蛋白的表达水平 | 第37-39页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞浓度和时间的优化 | 第39-44页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞不同浓度的确定 | 第39-42页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α浓度的确定 | 第39页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌IL-6浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌MIP-2浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌NO浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞不同时间的确定 | 第42-44页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α时间的确定 | 第42页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌IL-6时间的确定 | 第42-43页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌MIP-2时间的确定 | 第43-44页 |
| ·LPS刺激RAW264.7细胞分泌NO时间的确定 | 第44页 |
| ·CD14表达缺陷型RAW264.7细胞炎症模型的建立 | 第44-46页 |
| ·siRNA可抑制RAW264.7细胞发生炎症反应 | 第46-49页 |
| ·细胞培养上清中TNF-α的含量显著降低 | 第46-47页 |
| ·细胞培养上清中IL-6的含量显著降低 | 第47页 |
| ·细胞培养上清中MIP-2的含量显著降低 | 第47-48页 |
| ·细胞培养上清中NO的含量显著降低 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| ·有效siRNA干扰序列的设计与合成 | 第50页 |
| ·RAW264.7细胞的转染 | 第50-51页 |
| ·siRNA的干扰效率及特异性 | 第51页 |
| ·炎症细胞因子的检测 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
