| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-25页 |
| 1 盐藻及其耐盐机制的研究进展 | 第15-20页 |
| ·盐藻介绍 | 第15-16页 |
| ·盐藻的应用价值 | 第16页 |
| ·盐藻耐盐机制的研究进展 | 第16-20页 |
| ·渗透调节 | 第17-19页 |
| ·Na+外排 | 第19-20页 |
| 2 磷脂酶 C 及其研究进展 | 第20-23页 |
| ·磷脂酶概述 | 第20-21页 |
| ·磷脂酶 C 研究进展 | 第21-23页 |
| ·PLC 参与外界胁迫研究进展 | 第21-22页 |
| ·植物 PLC 途径的调控机制研究进展 | 第22-23页 |
| 3 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 4 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 盐藻 DsPLC 基因全长 cDNA 的克隆 | 第25-44页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| ·藻种 | 第25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25-26页 |
| ·引物序列 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-36页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取及质量检测 | 第26-28页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·RNA 的质量检测 | 第27-28页 |
| ·DsPLC 中间段保守序列的 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·简并引物的设计 | 第28页 |
| ·反转录 | 第28-29页 |
| ·中间段保守序列的 PCR 扩增 | 第29页 |
| ·电泳检测、凝胶回收、连接、转化 | 第29-31页 |
| ·电泳检测 | 第29页 |
| ·凝胶回收 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·目的基因与 pMD18-T 载体连接和转化 | 第31页 |
| ·双酶切和质粒 PCR 鉴定 | 第31-33页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·双酶切和质粒 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·RACE 扩增 DsPLC 的 5′末端和 3′末端 | 第33-35页 |
| ·RACE 引物的设计 | 第33页 |
| ·RACE 的反转录 | 第33-34页 |
| ·3′RACE 扩增反应 | 第34-35页 |
| ·目的片段的检测 | 第35页 |
| ·5′RACE 扩增反应 | 第35页 |
| ·PCR 扩增 DsPLC 全长序列 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增全长序列 | 第36页 |
| ·目的片段的检测 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-42页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增 DsPLC 保守中间片段序列 | 第37-38页 |
| ·氨基酸多序列比对和简并引物的设计 | 第37页 |
| ·中间片段序列的扩增以及双酶切、质粒 PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·RACE 扩增 DsPLC 的 3′末端和 5′末端 | 第38-41页 |
| ·RACE 扩增 DsPLC 的 3′末端 | 第38-40页 |
| ·RACE 扩增 DsPLC 的 5′末端 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增 DsPLC 全长序列 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·RNA 的提取 | 第42页 |
| ·RACE 扩增 | 第42-44页 |
| 第三章 盐藻 DsPLC 基因的生物信息学分析 | 第44-55页 |
| 1 分析方法 | 第44-46页 |
| ·核酸序列分析 | 第44页 |
| ·核酸序列组成分析 | 第44页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第44页 |
| ·稀有密码子和酶切位点分析 | 第44页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第44-46页 |
| ·氨基酸序列基本理化性质分析 | 第44-45页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第45页 |
| ·跨膜区预测 | 第45页 |
| ·信号肽分析 | 第45页 |
| ·保守结构域和功能区域预测 | 第45页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第45页 |
| ·蛋白质高级结构预测 | 第45页 |
| ·进化分析 | 第45-46页 |
| 2 分析结果 | 第46-53页 |
| ·核酸序列分析 | 第46-49页 |
| ·核酸序列组成分析 | 第46页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第46-48页 |
| ·稀有密码子和酶切位点分析 | 第48-49页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第49-53页 |
| ·氨基酸基本理化性质分析 | 第49页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第49页 |
| ·跨膜区域预测 | 第49-50页 |
| ·信号肽分析 | 第50-51页 |
| ·保守结构域和功能区域预测 | 第51页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第51-52页 |
| ·蛋白质高级结构预测 | 第52-53页 |
| ·进化分析 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 高盐胁迫对盐藻 DsPLC 基因表达的影响 | 第55-61页 |
| 1 实验材料 | 第55页 |
| ·藻种 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-58页 |
| ·盐藻高盐胁迫的处理 | 第55页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取和质量的检测 | 第55-56页 |
| ·反转录 | 第56页 |
| ·特异引物和内参引物的设计及验证 | 第56页 |
| ·相对标准曲线的制作 | 第56-57页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第57页 |
| ·实验结果的处理 | 第57-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-60页 |
| ·盐藻总 RNA 质量和浓度的检测 | 第58页 |
| ·引物特异性的检验结果 | 第58页 |
| ·相对标准曲线的制作 | 第58-59页 |
| ·荧光定量 PCR 结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 结论与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71页 |
