| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 目录 | 第13-19页 |
| 第一部分 miR-885-5p在原发性肝癌转移中作用机制的研究 | 第19-92页 |
| 第一章 引言 | 第19-35页 |
| 第一节 原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的研究现状 | 第19-22页 |
| ·肝癌的流行病学调查 | 第19页 |
| ·肝癌致病因素的研究 | 第19-22页 |
| 第二节 原发性肝细胞癌的治疗方法 | 第22-25页 |
| ·肝移植 | 第22页 |
| ·手术切除 | 第22-23页 |
| ·栓塞 | 第23-24页 |
| ·其他治疗方法 | 第24-25页 |
| 第三节 miRNAs的研究进展 | 第25-30页 |
| ·miRNAs的生物学特性 | 第25-26页 |
| ·miRNAs的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关 | 第26页 |
| ·miRNAs可以促进或者抑制肿瘤的发生及发展 | 第26-27页 |
| ·循环miRNAs可作为一种潜在的肿瘤标志物 | 第27页 |
| ·miRNAs在HCC中的研究 | 第27-30页 |
| 第四节 miR-885-5p在肿瘤中的研究现状 | 第30-31页 |
| 第五节 Wnt信号通路在肿瘤中的研究现状 | 第31-33页 |
| 第六节 本课题的研究内容 | 第33页 |
| 第七节 本部分的研究结构 | 第33-35页 |
| 第二章 仪器与方法 | 第35-62页 |
| 第一节 仪器设备 | 第35-36页 |
| 第二节 菌株、细胞系、载体和组织芯片以及冻存组织 | 第36页 |
| ·细菌感受态 | 第36页 |
| ·细胞系 | 第36页 |
| ·质粒与载体 | 第36页 |
| ·组织芯片以及冻存组织 | 第36页 |
| 第三节 实验试剂 | 第36-38页 |
| ·生物酶试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基和抗生素 | 第37页 |
| ·电泳试剂 | 第37页 |
| ·RT-PCR相关试剂 | 第37页 |
| ·抗体 | 第37页 |
| ·其它试剂 | 第37-38页 |
| 第四节 细胞培养 | 第38-39页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第38页 |
| ·冻存细胞 | 第38页 |
| ·稳定细胞系的建立 | 第38-39页 |
| 第五节 Real time qPCR | 第39-43页 |
| ·RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·miRNA的反转录 | 第40-41页 |
| ·第一链cDNA反转录 | 第41页 |
| ·miRNA Real-time qPCR反应 | 第41-42页 |
| ·普通基因的Real-time qPCR反应 | 第42-43页 |
| 第六节 原位杂交检测miR-885-5p在HCC组织芯片中的表达 | 第43-47页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·步骤 | 第45-47页 |
| ·显微镜观察 | 第47页 |
| 第七节 免疫印迹杂交(Western Blot) | 第47-51页 |
| ·Western Blot所需溶液的配制 | 第47-48页 |
| ·免疫印迹杂交(Western Blot)用SDS-PAGE溶液配制 | 第48页 |
| ·蛋白裂解液配方 | 第48-49页 |
| ·步骤 | 第49-51页 |
| 第八节 HE染色 | 第51-52页 |
| 第九节 细胞迁移和侵袭实验 | 第52页 |
| ·细胞侵袭分析实验 | 第52页 |
| ·细胞划痕实验 | 第52页 |
| 第十节 双荧光报告分析 | 第52-56页 |
| ·双荧光报告质粒的构建 | 第52-55页 |
| ·高纯度质粒小提实验 | 第55页 |
| ·双荧光报告分析实验 | 第55-56页 |
| 第十一节 细胞免疫荧光 | 第56-57页 |
| 第十二节 免疫组织化学 | 第57-59页 |
| 第十三节 动物模型的建立 | 第59-60页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·皮下成瘤 | 第59页 |
| ·原位成瘤 | 第59-60页 |
| ·瘤内注射 | 第60页 |
| 第十四节 生物发光成像 | 第60-61页 |
| ·实验仪器及材料 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| 第十五节 数据分析 | 第61-62页 |
| 第三章 结果与分析 | 第62-83页 |
| 第一节 miR-885-5p与HCC恶性程度的关系 | 第62-65页 |
| ·miR-885-5p在不同临床分期的HCC组织中的表达情况 | 第62-64页 |
| ·miR-885-5p在不同HCC细胞系中的表达情况 | 第64-65页 |
| 第二节 miR-885-5p对HCC病人预后的影响 | 第65-66页 |
| 第三节 miR-885-5p对HCC转移的影响 | 第66-70页 |
| ·过表达miR-885-5p对HCC细胞系迁移和浸润的影响 | 第66-68页 |
| ·过表达miR-885-5p在体内对HCC转移的影响 | 第68-70页 |
| 第四节 miR-885-5p对HCC增殖的影响 | 第70-72页 |
| ·沉默miR-885-5p对HepG2细胞增殖的影响 | 第70-71页 |
| ·过表达miR-885-5p在体内对HCC生长的影响 | 第71-72页 |
| 第五节 miR-885-5p对目标基因和下游信号通路的影响 | 第72-74页 |
| ·过表达miR-885-5p对目标基因CTNNB1和TCF4表达的抑制作用 | 第72-74页 |
| ·过表达miR-885-5p对Wnt/β-catenin信号通路活性的抑制作用 | 第74-78页 |
| ·沉默miR-885-5p对目标基因CTNNB1和TCF4表达上调作用 | 第77-78页 |
| ·沉默miR-885-5p对Wnt/β-catenin信号通路活性的上调作用 | 第78页 |
| 第六节 miR-885-5p在HCC组织标本中与β-catenin和TCF4表达的相关性分析 | 第78-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-90页 |
| 第五章 主要结论 | 第90-92页 |
| 第一节 本部分主要结论 | 第90页 |
| 第二节 主要创新点 | 第90-91页 |
| 第三节 研究前景展望 | 第91-92页 |
| 第二部分 miR-885-5p在弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖中作用机制的研究 | 第92-124页 |
| 第一章 引言 | 第92-100页 |
| 第一节 弥漫性大B细胞淋巴瘤的研究现状 | 第92-96页 |
| ·弥漫性大B细胞淋巴瘤的概况 | 第92-94页 |
| ·DLBCL的临床治疗 | 第94-96页 |
| 第二节 miRNAs在淋巴瘤中的作用 | 第96-97页 |
| ·miRNAs在B细胞分化中的作用 | 第96页 |
| ·miRNAs与DLBCL | 第96-97页 |
| ·靶向miRNAs的治疗 | 第97页 |
| 第三节 淋巴细胞溶质蛋白1的研究进展 | 第97-98页 |
| 第四节 本课题的研究内容 | 第98页 |
| 第五节 本课题研究方案 | 第98-100页 |
| 第二章 仪器与方法 | 第100-110页 |
| 第一节 细胞系的培养 | 第100页 |
| 第二节 试剂和仪器 | 第100页 |
| 第三节 转染实验 | 第100-101页 |
| 第四节 Real-time qPCR | 第101-104页 |
| ·RNA的提取 | 第101-102页 |
| ·miRNA的反转录 | 第102-103页 |
| ·第一链cDNA反转录 | 第103页 |
| ·miRNA Real-time qPCR反应 | 第103-104页 |
| 第五节 免疫印迹杂交(Western Blot) | 第104-107页 |
| ·Western Blot所需溶液的配制 | 第104页 |
| ·免疫印迹杂交(Western Blot)用SDS-PAGE溶液配制 | 第104-105页 |
| ·蛋白裂解液配方 | 第105页 |
| ·步骤 | 第105-107页 |
| 第六节 双荧光报告分析 | 第107-108页 |
| 第七节 PI细胞周期进展 | 第108页 |
| 第八节 数据分析 | 第108-110页 |
| 第三章 结果与分析 | 第110-116页 |
| 第一节 miR-885-5p在DLBCL肿瘤细胞系中低表达 | 第110页 |
| 第二节 过表达miR-885-5p降低DLBCL细胞OCI-LY3细胞的增殖 | 第110-111页 |
| 第三节 沉默miR-885-5p促进DLBCL细胞VAL细胞的增殖 | 第111-112页 |
| 第四节 miR-885-5p可以结合L-plastin的3’UTR区,并且抑制其表达 | 第112-113页 |
| 第五节 沉默L-plastin后抑制OCI-LY3细胞的增殖 | 第113页 |
| 第六节 沉默L-plastin后抑制OCI-LY19细胞的增殖 | 第113-116页 |
| 第四章 讨论 | 第116-123页 |
| 第五章 主要结论 | 第123-124页 |
| 第一节 主要结论 | 第123页 |
| 第二节 主要创新点 | 第123页 |
| 第三节 研究前景展望 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 综述 | 第133-145页 |
| 参考文献 | 第141-145页 |
| 个人简历 | 第145-146页 |
| 发表论文 | 第146页 |
