| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-29页 |
| ·古菌 | 第11-13页 |
| ·硫化叶菌 | 第13-14页 |
| ·硫化叶菌遗传操作体系 | 第14-19页 |
| ·原核生物CRISPR/Cas获得性免疫系统 | 第19-25页 |
| ·CRISPR免疫适应阶段机制 | 第25-27页 |
| ·古菌启动子主要元件 | 第27页 |
| ·研究目的及内容 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-41页 |
| ·实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·培养基成分及培养条件 | 第29-31页 |
| ·主要仪器和分子生物学试剂 | 第31-32页 |
| ·实验方法与原理 | 第32-41页 |
| ·敲除载体构建 | 第32-34页 |
| ·缺失菌株筛选 | 第34-35页 |
| ·硫化叶菌S.islandicus E233S感受态细胞制备和电击转化法 | 第35-36页 |
| ·硫化叶菌总RNA抽提 | 第36-37页 |
| ·反转录荧光定量PCR | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态制备和热击转化法 | 第38页 |
| ·Csa3a蛋白的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE和蛋白保存和抗体制备 | 第39页 |
| ·凝胶阻滞分析(EMSA) | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-56页 |
| ·构建敲除载体 | 第41-43页 |
| ·缺失菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·Csa3a蛋白的表达纯化 | 第44-46页 |
| ·csa3a、cmr2a、cmr2b缺失菌株Targeting功能检测 | 第46-48页 |
| ·CRISPR功能验证载体构建 | 第46-47页 |
| ·缺失菌株CRISPR功能验证 | 第47-48页 |
| ·反转录荧光定量PCR确定csa3a缺失菌株acas基因转录量变化 | 第48-50页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA)确定Csa3a结合位点 | 第50-56页 |
| ·激活位点初步探索 | 第50-51页 |
| ·csal结合位点初步探究 | 第51-52页 |
| ·csal结合位点的确定 | 第52-53页 |
| ·casl结合位点的确定 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 硕士期间学术成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
