| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 纳米抗体简介以及大肠杆菌中重组蛋白质可溶性表达的研究 | 第11-23页 |
| ·纳米抗体以及结构特点 | 第11-12页 |
| ·纳米抗体的理化特性 | 第12页 |
| ·纳米抗体在免疫诊断和治疗中的应用 | 第12-13页 |
| ·纳米抗体作为肿瘤诊断工具 | 第12-13页 |
| ·纳米抗体作为肿瘤治疗工具 | 第13页 |
| ·大肠杆菌外源基因表达 | 第13-18页 |
| ·原核表达系统面临的缺点 | 第14页 |
| ·提高原核表达系统表达效率策略 | 第14-15页 |
| ·融合表达 | 第15-18页 |
| ·Intein 内含肽 | 第18-23页 |
| ·内含肽的结构 | 第19页 |
| ·内含肽核酸内切酶区域 | 第19-20页 |
| ·内含肽剪切机制 | 第20-21页 |
| ·利用 Intein 介导蛋白质纯化过程的机理 | 第21-22页 |
| ·Intein 内含肽介导蛋白质连接技术 | 第22页 |
| ·Intein 介导蛋白质环化作用 | 第22-23页 |
| 第二章 抗猪圆环病毒 2（PCV2）型 Cap 蛋白纳米抗体基因的克隆以及不同表达载体的构建 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·克隆纳米抗体模板质粒 | 第23页 |
| ·载体与菌株 | 第23-24页 |
| ·酶及试剂 | 第24页 |
| ·培养基的配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·纳米抗体 VHH 的扩增 | 第25-27页 |
| ·三种带有不同融合标签的表达载体的构建 | 第27-30页 |
| ·重组质粒 PHSIE-VHH、 pET32a-Intein-VHH 和 PHSIE-Intein-VHH 的诱导表达 | 第30页 |
| ·三种表达产物的 SDS-PAGE 检测 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·纳米抗体基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第31页 |
| ·表达载体 PHSIE-VHH、pET32a-Intein-VHH、PHSIE-Intein-VHH 的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·三种重组载体诱导表达分析 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 第三章 Intein 自介导的抗猪圆环病毒纳米抗体的纯化和蛋白活性检测 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白 | 第35页 |
| ·血清及酶标抗体 | 第35页 |
| ·融合蛋白纯化仪器 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·纳米抗体重组蛋白的大量诱导表达 | 第36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·Intein 介导的重组蛋白融合标签的去除 | 第36-37页 |
| ·方法双抗体夹心 ELISA 方法检测蛋白活性 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·纳米抗体重组蛋白的大量诱导表达 | 第38页 |
| ·Intein 介导的蛋白纯化 | 第38-39页 |
| ·双抗夹心 ELISA 检测蛋白活性 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
