| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文縮略词 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·拟南芥AT14A蛋白 | 第12-18页 |
| ·动物整合素 | 第12-13页 |
| ·植物类整合素 | 第13-15页 |
| ·AT14A蛋白的发现 | 第15-16页 |
| ·AT14A蛋白的结构和性质 | 第16-17页 |
| ·AT14A的结构与定位 | 第16-17页 |
| ·AT14A蛋白同源性分析 | 第17页 |
| ·AT14A的研究进展 | 第17-18页 |
| ·蛋白的相互作用研究 | 第18-25页 |
| ·蛋白相互作用的研究方法 | 第18-21页 |
| ·亲和纯化/质谱法 | 第19页 |
| ·酵母双杂交法 | 第19-21页 |
| ·蛋白相互作用的研究进展 | 第21-25页 |
| ·相互作用组学 | 第22页 |
| ·作为系统生物学研究工具 | 第22-23页 |
| ·新兴Y2H系统 | 第23-25页 |
| 第二章 酵母双杂交法筛选AT14A蛋白互作蛋白 | 第25-38页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-30页 |
| ·质粒与试剂 | 第25页 |
| ·AT14A基因的克隆与诱饵质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·拟南芥RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第26页 |
| ·AT14A基因TA克隆 | 第26-27页 |
| ·重组诱饵质粒的构建与转化 | 第27页 |
| ·利用重组诱饵质粒筛选拟南芥cDNA文库 | 第27-29页 |
| ·重组诱饵质粒转化酵母菌株AH109 | 第27-28页 |
| ·重组诱饵质粒自激活及毒性检测 | 第28页 |
| ·cDNA文库筛选 | 第28-29页 |
| ·阳性菌落pGADT7文库质粒测序分析 | 第29页 |
| ·质粒相互作用的二次验证 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-36页 |
| ·AT14A-N、AT14A-C基因的克隆 | 第30页 |
| ·构建诱饵重组质粒 | 第30-32页 |
| ·重组诱饵质粒的自激活及毒性检测 | 第32页 |
| ·酵母AH109与文库酵母Y187的融合检验 | 第32-33页 |
| ·cDNA文库筛选结果 | 第33-35页 |
| ·对互作进一步验证的结果 | 第35-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 AT14A互作蛋白的体外验证 | 第38-55页 |
| ·免疫共沉淀法体外验证互作蛋白 | 第38-46页 |
| ·引言 | 第38-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·酵母质粒的提取与转化 | 第40页 |
| ·蛋白的小量表达检测 | 第40页 |
| ·蛋白提取及可溶性检测 | 第40页 |
| ·Co-IP操作过程 | 第40-42页 |
| ·Western Blot鉴定重组标签蛋白 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·阳性酵母质粒的提取与转化 | 第42-44页 |
| ·蛋白提取及可溶性检测 | 第44页 |
| ·Co-IP验证相互作用 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·GST-pull down法筛选验证互作蛋白 | 第46-55页 |
| ·原理 | 第46-47页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·原核表达载体构建与转化 | 第47页 |
| ·GST融合蛋白表达与可溶性蛋白提取 | 第47-48页 |
| ·GST融合蛋白亲和纯化 | 第48页 |
| ·GST-pull down验证互作蛋白 | 第48页 |
| ·GST-pull down体外筛选互作蛋白 | 第48-49页 |
| ·结果分析 | 第49-54页 |
| ·构建pGEX/AT14A重组质粒 | 第49-50页 |
| ·蛋白表达情况检测 | 第50-51页 |
| ·亲和层析 | 第51-52页 |
| ·GST-pull down验证互作 | 第52-53页 |
| ·互作蛋白的筛选结果 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 qPCR分析各候选互作蛋白的mRNA表达情况 | 第55-59页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-57页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第56页 |
| ·定量PCR | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-58页 |
| ·RNA提取检测 | 第57页 |
| ·定量分析 | 第57-58页 |
| ·小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-64页 |
| ·总结 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |