| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·乳酸菌及其特性 | 第12-14页 |
| ·乳酸菌的种类及主要功能特性 | 第12-13页 |
| ·乳酸菌基因组学研究进展 | 第13-14页 |
| ·乳酸菌是作为基因工程受体菌的应用价值 | 第14页 |
| ·乳酸菌基因工程的载体质粒 | 第14-16页 |
| ·乳酸菌表达载体的构成 | 第15页 |
| ·乳酸菌表达载体的类型 | 第15-16页 |
| ·二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的原理及应用 | 第16-17页 |
| ·启动子的生物信息学预测和分析 | 第17-18页 |
| ·启动子克隆方法研究进展 | 第18-20页 |
| ·基因组文库筛选法 | 第18页 |
| ·启动子探针型载体筛选法 | 第18-19页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第19-20页 |
| ·本研究的意义及目的 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-39页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌株禾口质粒载体 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·主要生化试剂 | 第22页 |
| ·二维聚丙烯酸胺凝胶电泳所用试剂 | 第22-23页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂 | 第23页 |
| ·免疫印迹(Western-blot)主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·主耍试验仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·引物合成 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·GUS蛋白的多克隆抗体制备 | 第25-29页 |
| ·表达GUS蛋白重组干酪乳杆菌的构建 | 第29-35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分 | 第35-36页 |
| ·表达产物的Western-blot鉴 | 第36页 |
| ·启动子转录强度的荧光定量PCR分 | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-47页 |
| ·GUS蛋白多克隆抗体的制备 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体pCold-gusA的鉴定 | 第39页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达蛋白的鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的表达形式分析 | 第40页 |
| ·间接ELISA检测免疫兔血清抗体效价结果 | 第40页 |
| ·干酪乳杆菌分泌上清的二维电泳银染及挖点蛋白的质谱结果 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增启动子序列PPH和LDH的结果 | 第42页 |
| ·重组质粒pMD18-T-PPH/LDH的鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·干酪乳杆菌表达载体PPH-pPG612与LDH-pPG612的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白表达鉴定结果 | 第44页 |
| ·重组干酪乳杆菌PPH-pPG612/L.cose/表达蛋白的分泌上清鉴定 | 第44-45页 |
| ·实时荧光定量PCR检测结果 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·二维聚丙烯安凝胶电泳对乳酸菌分泌蛋白的分离鉴定 | 第47页 |
| ·生物信息学方法在启动子预测中的应用 | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR方法在基因工程检测方面的应用 | 第48页 |
| ·构建得到的乳酸菌组成型启动子分泌表达载体的应用及展望 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
