| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| ·豇豆花叶病毒亚科概述 | 第12-16页 |
| ·豇豆花叶病毒属 | 第12-13页 |
| ·蚕豆病毒属 | 第13-14页 |
| ·线虫传多面体病毒属 | 第14-16页 |
| ·南芥菜花叶病毒 | 第16页 |
| ·简并PCR技术(degenerate PCR) | 第16-19页 |
| ·基本原理 | 第16-17页 |
| ·在植物病毒检测中的应用 | 第17-19页 |
| ·多重PCR技术 | 第19-22页 |
| ·多重PCR技术及原理 | 第19页 |
| ·在植物病毒检测中的应用 | 第19-22页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第22-26页 |
| ·扩增原理 | 第23-24页 |
| ·引物设计原则 | 第24-25页 |
| ·扩增产物的检测方法 | 第25页 |
| ·LAMP技术在植物病毒检测中的应用 | 第25-26页 |
| ·LAMP技术的展望 | 第26页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-35页 |
| ·试验材料 | 第27-28页 |
| ·实验毒源 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA) | 第28-29页 |
| ·病样总RNA提取 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·目的片段的扩增 | 第30-31页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第30页 |
| ·RT-PCR | 第30-31页 |
| ·多重RT-PCR | 第31页 |
| ·RT-LAMP反应体系的建立 | 第31页 |
| ·目的片段的克隆 | 第31-35页 |
| ·PCR产物回收 | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·菌落PCR鉴定重组质粒 | 第33页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第33-34页 |
| ·序列测定与基因组生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-60页 |
| ·南芥菜花叶病毒(ArMV-NL)荷兰分离物全基因组序列测定及分析 | 第35-45页 |
| ·引物设计与基因组扩增策略 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·ArMV-NL全基因组结构 | 第37页 |
| ·ArMV-NL RNA1序列分析 | 第37-39页 |
| ·ArMV-NL RNA2序列分析 | 第39页 |
| ·ArMV-NL RNA1编码区分析 | 第39-40页 |
| ·ArMV-NL RNA2编码区分析 | 第40-43页 |
| ·ArMV-NL荷兰分离物的系统进化分析及分类地位的确定 | 第43-45页 |
| ·豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属通用分子检测的优化 | 第45-49页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·简并引物ComfabF2/ComfabR2条件优化 | 第46-47页 |
| ·简并引物ComfabF2/ComfabR2的通用性分析 | 第47页 |
| ·PCR产物直接测序验证 | 第47-48页 |
| ·简并引物ComfabF2/ComfabR2特异性分析 | 第48页 |
| ·灵敏性对比试验 | 第48-49页 |
| ·种检疫性线虫传多面体病毒属多重RT-PCR检测 | 第49-55页 |
| ·多重RT-PCR引物设计 | 第49-50页 |
| ·引物浓度对多重RT-PCR扩增效果的影响 | 第50页 |
| ·多重RT-PCR反应体系的优化 | 第50-51页 |
| ·多重RT-PCR循环条件的优化 | 第51-52页 |
| ·单重RT-PCR和多重RT-PCR电泳检测结果 | 第52-53页 |
| ·PCR产物序列分析 | 第53页 |
| ·多重RT-PCR的特异性试验 | 第53-54页 |
| ·单重RT-PCR和多重RT-PCR的灵敏性试验 | 第54-55页 |
| ·豇豆重花叶病毒(CPSMV)RT-LAMP检测 | 第55-60页 |
| ·引物设计 | 第55-56页 |
| ·反应体系的优化结果 | 第56-57页 |
| ·产物检测 | 第57-58页 |
| ·特异性试验 | 第58-59页 |
| ·RT-LAMP的灵敏性试验 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| ·南芥菜花叶病毒(ArMV-NL)荷兰分离物全基因组序列测定及分析 | 第60-61页 |
| ·豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属通用分子检测的优化 | 第61页 |
| ·5种检疫性线虫传多面体病毒属多重RT-PCR检测 | 第61-62页 |
| ·豇豆重花叶病毒(CPSMV)RT-LAMP检测 | 第62-64页 |
| 小结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 附录Ⅰ 缩写词和英汉对照 | 第75页 |
| 附录Ⅱ 重要溶液的配置 | 第75-77页 |
| 附录Ⅲ 发表文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
