| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 缩略语表 | 第6-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-20页 |
| ·食物过敏 | 第10-11页 |
| ·花生过敏原 | 第11-13页 |
| ·Arah1 | 第11-12页 |
| ·Arah2 | 第12-13页 |
| ·其它花生过敏原 | 第13页 |
| ·天然食物过敏原 | 第13-17页 |
| ·天然食物过敏原的特点 | 第13-14页 |
| ·天然食物过敏原的分离纯化 | 第14-16页 |
| ·天然食物过敏原的应用 | 第16-17页 |
| ·重组过敏原 | 第17-18页 |
| ·重组过敏原的特点及应用 | 第17页 |
| ·重组过敏原的克隆表达 | 第17-18页 |
| ·研究的目的、意义和研究内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的与意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 第2章 花生过敏原Arah 1的分离纯化 | 第20-32页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料与设备 | 第20-22页 |
| ·材料与试剂 | 第20页 |
| ·仪器与设备 | 第20-21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·花生脱脂 | 第22页 |
| ·蛋白浸提 | 第22页 |
| ·花生过敏原Arah 1的纯化 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE与Native-PAGE检测所分离蛋白的纯度 | 第23-24页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第24页 |
| ·质谱鉴定 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-30页 |
| ·花生蛋白浸提液电泳分析 | 第25页 |
| ·分离纯化花生过敏原Arah 1 | 第25-28页 |
| ·花生过敏原Arah 1的质谱鉴定 | 第28页 |
| ·花生过敏原Arah 1的Native-PAGE鉴定结果 | 第28-30页 |
| ·花生过敏原Arah 1最终提取得率 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第3章 抗花生过敏原Arah 1多克隆抗体的制备 | 第32-39页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与设备 | 第32-34页 |
| ·试剂与材料 | 第32页 |
| ·主要仪器与设备 | 第32-33页 |
| ·溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·抗原的准备 | 第34页 |
| ·免疫方案 | 第34页 |
| ·血清的分离 | 第34页 |
| ·最佳抗原包被浓度的确定 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA测抗体效价 | 第35页 |
| ·免疫印迹 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-37页 |
| ·最佳抗原包被浓度 | 第36页 |
| ·免疫过程中抗体效价的变化 | 第36-37页 |
| ·免疫印迹鉴定抗体特异性 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第4章 花生过敏原Arah 1基因的克隆 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料与及设备 | 第39-41页 |
| ·菌株、质粒 | 第39页 |
| ·酶和主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器与设备 | 第40页 |
| ·PCR引物 | 第40页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-47页 |
| ·花生种子总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·RNA纯度的鉴定 | 第42页 |
| ·RNA电泳分析 | 第42页 |
| ·反转录(RT)反应 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增 | 第43页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第43页 |
| ·RT-PCR产物的纯化回收 | 第43-44页 |
| ·PCR产物与pMD 18-T Simple Vector的连接 | 第44页 |
| ·大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第45页 |
| ·细菌原位PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的提取 | 第46页 |
| ·限制内切酶酶切鉴定 | 第46页 |
| ·DNA测序及序列同源性分析 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·紫外分光光度仪检测总RNA | 第47页 |
| ·总RNA琼脂糖电泳 | 第47-48页 |
| ·目的基因的RT-PCR | 第48-49页 |
| ·重组质粒菌落原位PCR鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·测序结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第5章 花生过敏原Arah 1的原核表达与纯化 | 第53-67页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·菌株、质粒 | 第53页 |
| ·工具酶、主要生化试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器与设备 | 第54页 |
| ·PCR引物 | 第54页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·Arah 1的原核表达 | 第55-58页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·花生过敏原Arah 1的原核表达 | 第58-64页 |
| ·表达蛋白的亲和纯化 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第6章 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67页 |
| ·本研究创新点 | 第67-68页 |
| ·建议与展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读学位期间科研成果 | 第75页 |
