| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 Lysostaphin 概述 | 第12-18页 |
| ·Lysostaphin 的理化性质 | 第12-13页 |
| ·Lysostaphin 的酶学性质 | 第13-14页 |
| ·产生菌生理学功能 | 第14页 |
| ·抗菌作用机制 | 第14页 |
| ·基因克隆及表达研究 | 第14-15页 |
| ·药效学研究 | 第15-17页 |
| ·体外实验 | 第15-16页 |
| ·动物实验 | 第16页 |
| ·应用前景展望 | 第16-17页 |
| ·结论 | 第17-18页 |
| 第二章 重组Lysostaphin 的原核表达、纯化及活性分析 | 第18-26页 |
| ·材料与试剂 | 第18-19页 |
| ·质粒和菌株 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·基因扩增与鉴定 | 第19页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第19-20页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第20页 |
| ·重组蛋白原核表达诱导时间的确定 | 第20页 |
| ·重组蛋白的原核表达与纯化 | 第20页 |
| ·重组蛋白的活性研究 | 第20-21页 |
| ·结果 | 第21-24页 |
| ·基因合成与扩增 | 第21页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第21-22页 |
| ·IPTG 最佳诱导时间的确定 | 第22-23页 |
| ·重组Lysostaphin 的原核表达与纯化 | 第23-24页 |
| ·重组Lysostaphin 的体外活性研究 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 第三章 Lysostaphin 牛乳腺表达载体的构建 | 第26-32页 |
| ·材料与方法 | 第26-28页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·质粒和菌株 | 第26页 |
| ·动物组织 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-28页 |
| ·目的基因的获取与鉴定 | 第27页 |
| ·β-酪蛋白5′端与3′端扩增及PBCT 载体构建与鉴定 | 第27页 |
| ·Lysostaphin 基因初级乳腺表达载体的构建与鉴定 | 第27-28页 |
| ·Lysostaphin 牛乳腺特异表达载体的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·目的基因的获取与鉴定 | 第28页 |
| ·β-酪蛋白5′端与3′端扩增及PBCT 载体构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·Lysostaphin 基因初级乳腺表达载体的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·Lysostaphin 牛乳腺表达载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| ·结论 | 第31-32页 |
| 第四章 PEPB 介导Lysostaphin 在牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第32-37页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·细胞 | 第32页 |
| ·试剂与仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·PEPB 重组质粒的纯化 | 第32页 |
| ·乳腺细胞的解冻与体外培养 | 第32-33页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染 | 第33页 |
| ·Lysostaphin 基因在牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·重组质粒PEPB 的纯化 | 第33页 |
| ·乳腺细胞的解冻与体外培养 | 第33-34页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染及绿色荧光的表达 | 第34页 |
| ·Lysostaphin 基因在牛乳腺细胞中的表达 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 第五章 转Lysostaphin 基因细胞的制备与鉴定 | 第37-44页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·细胞 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·特异表达载体PEPB 的纯化 | 第38页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞解冻与培养 | 第38页 |
| ·G418 最小致死浓度的测定 | 第38页 |
| ·电转染牛胎儿成纤维细胞，单克隆细胞的筛选与扩大培养 | 第38页 |
| ·单克隆核供体细胞的PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·Southern blot 检测目的基因是否整合到阳性细胞的基因组中 | 第39页 |
| ·转基因克隆胚的制备与验证 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·牛乳腺特异表达载体的纯化与鉴定 | 第39页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的转染与筛选 | 第39-40页 |
| ·单克隆核供体细胞PCR 鉴定 | 第40-41页 |
| ·Southern blot 检测目的基因是否整合到阳性细胞的基因组中 | 第41-42页 |
| ·转基因克隆胚的获得 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
