| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-29页 |
| ·芽变的概念与特点 | 第16-17页 |
| ·芽变基础 | 第17-18页 |
| ·芽变在果树品种改良中的作用 | 第18页 |
| ·芽变机理研究方法 | 第18-20页 |
| ·芽变研究中的分子标记应用进展 | 第18-19页 |
| ·基于转录水平的芽变研究 | 第19-20页 |
| ·差别筛选 | 第19页 |
| ·差异显示 | 第19页 |
| ·代表性差异分析 | 第19-20页 |
| ·cDNA-AFLP 技术 | 第20页 |
| ·果树芽变机理研究进展 | 第20-21页 |
| ·染色体结构和数目的变异 | 第20页 |
| ·DNA 甲基化 | 第20-21页 |
| ·反转录转座子 | 第21页 |
| ·苹果短枝型突变体的研究进展 | 第21-22页 |
| ·高等植物赤霉素研究进展 | 第22-27页 |
| ·高等植物赤霉素的生物合成途径 | 第22-23页 |
| ·赤霉素合成关键酶的研究进展 | 第23-25页 |
| ·古巴焦磷酸合成酶（Copalyl pyrophosphate synthase，CPS） | 第23页 |
| ·内根-贝壳杉烯合成酶（ent-kaurene synthase，KS） | 第23-24页 |
| ·内根-贝壳杉烯氧化酶（ent-kaurene oxidase，KO） | 第24页 |
| ·GA20-氧化酶 | 第24-25页 |
| ·GA3 -羟化酶 | 第25页 |
| ·赤霉素矮化突变体研究 | 第25-27页 |
| ·赤霉素合成型矮化突变体 | 第25页 |
| ·赤霉素响应型矮化突变体 | 第25-27页 |
| ·抑制差减杂交（SSH）技术的发展与应用 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-46页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·载体 | 第29页 |
| ·酶和生化试剂 | 第29-30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·各种溶液和缓冲液 | 第30页 |
| ·细菌的制备与转化方法 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第30-31页 |
| ·农杆菌感受态的制备与转化 | 第31页 |
| ·拟南芥的培养与转化 | 第31-32页 |
| ·苹果枝条节间长度的测量 | 第32页 |
| ·赤霉素含量测定 | 第32-33页 |
| ·果实可溶性糖、可滴定酸测定 | 第33页 |
| ·果实硬度和可溶性固形物的测定 | 第33-34页 |
| ·植物基因组 DNA 的提取 | 第34页 |
| ·ISSR 分子标记鉴定‘龙富短枝’与‘长富二号’的亲缘关系 | 第34-35页 |
| ·总 RNA 提取、mRNA 纯化及 cDNA 合成 | 第35-36页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第35页 |
| ·mRNA 的纯化 | 第35页 |
| ·cDNA 的合成 | 第35-36页 |
| ·抑制性差减 cDNA 文库构建 | 第36-39页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第36页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第36-37页 |
| ·RsaI 酶消化 | 第37页 |
| ·接头连接 | 第37-38页 |
| ·差减杂交 | 第38页 |
| ·第一轮杂交 | 第38页 |
| ·第二轮杂交 | 第38页 |
| ·两次 PCR 选择性扩增 | 第38-39页 |
| ·基因的克隆 | 第39-42页 |
| ·抑制性差减文库中基因全长的克隆 | 第39-40页 |
| ·GA20-氧化酶和贝壳杉烯氧化酶的克隆 | 第40页 |
| ·苹果 GA 受体 MdGID1 基因的克隆 | 第40页 |
| ·苹果 MdRGL 基因的克隆 | 第40页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物连接克隆载体 | 第41页 |
| ·DNA 序列测定 | 第41页 |
| ·序列分析 | 第41页 |
| ·MdGID1 基因启动子的克隆 | 第41页 |
| ·表达载体构建 | 第41-42页 |
| ·pET30-MdGID1 和 pGEX-4T-MdRGL 原核表达载体的构建 | 第41页 |
| ·pBI121-MdGID1 真核表达载体的构建 | 第41页 |
| ·酶切反应 | 第41-42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术 | 第42-43页 |
| ·蛋白质技术 | 第43-46页 |
| ·原核表达 MdGID1 和 MdRGL 蛋白 | 第43页 |
| ·纯化原核表达的蛋白 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第43-44页 |
| ·Western Blot 分析蛋白 | 第44-46页 |
| ·转膜（湿转） | 第44-45页 |
| ·Western Blot | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-76页 |
| ·ISSR 分子标记 | 第46-47页 |
| ·枝条节间长度的比较 | 第47-48页 |
| ·苹果‘长富二号’与其短枝型芽变‘龙富短枝’中 GA 含量的变化 | 第48-49页 |
| ·果实相关指标的测定 | 第49页 |
| ·苹果 GA 合成途径中关键基因的克隆和表达分析 | 第49-53页 |
| ·GA20-氧化酶和贝壳杉烯氧化酶的克隆和序列分析 | 第49-50页 |
| ·GA20-氧化酶和贝壳杉烯氧化酶的表达分析 | 第50-53页 |
| ·抑制性差减文库构建 | 第53-61页 |
| ·总 RNA 和 mRNA 质量检测 | 第53页 |
| ·文库中插入片段的检测 | 第53-54页 |
| ·差减产物的克隆 | 第54页 |
| ·生物信息学分析 | 第54-61页 |
| ·EST 数据分析 | 第54-57页 |
| ·利用 RACE 方法分离差异表达基因的 ORF 序列 | 第57页 |
| ·与短枝型芽变枝条形成相关的代谢基因 | 第57页 |
| ·与短枝型芽变枝条形成相关的防御基因 | 第57页 |
| ·与短枝型芽变枝条形成相关的转录因子 | 第57-61页 |
| ·MdGID1 基因的克隆及序列分析 | 第61-71页 |
| ·MdGID1 基因全长克隆 | 第61-62页 |
| ·MdGID1 基因序列分析 | 第62-63页 |
| ·MdGID1 基因系统进化分析 | 第63-64页 |
| ·MdGID1 基因组序列克隆和分析 | 第64页 |
| ·MdGID1 基因上游调控序列克隆与序列分析 | 第64-65页 |
| ·MdGID1 基因的表达分析 | 第65-68页 |
| ·MdGID1 基因的原核表达分析 | 第68-71页 |
| ·MdGID1 Western blot 检测 | 第71页 |
| ·MdRGL 基因的克隆、序列分析及原核表达 | 第71-76页 |
| ·MdRGL 基因全长克隆 | 第71-72页 |
| ·基因序列分析 | 第72-73页 |
| ·融合表达载体 pGEX-4T-MdRGL 的构建与 PCR 鉴定 | 第73-74页 |
| ·融合表达载体 pGEX-4T-MdRGL 在大肠杆菌中的诱导表达和电泳分析 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-83页 |
| ·‘龙富短枝’枝条中低赤霉素含量机理探讨 | 第76-77页 |
| ·与短枝型芽变性状相关的候选基因 | 第77-80页 |
| ·代谢途径 | 第78页 |
| ·转录调节 | 第78-80页 |
| ·胁迫响应 | 第80页 |
| ·转运 | 第80页 |
| ·GA-GID1-DELLA 机制响应赤霉素信号 | 第80-83页 |
| 5 结论 | 第83-84页 |
| 本文创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-102页 |
| 附录 | 第102-108页 |
| 本文中使用的引物 | 第102-106页 |
| 常用缓冲液及培养基的配制 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第109页 |
