| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-37页 |
| ·HC-Pro 参与病毒的蚜传 | 第15-20页 |
| ·蚜传的机理 | 第15-17页 |
| ·KITC 基序与蚜虫口针结合 | 第17页 |
| ·PTK 基序与病毒粒子结合 | 第17-18页 |
| ·其他参与蚜传的位点 | 第18-19页 |
| ·介导其他病毒的蚜传 | 第19-20页 |
| ·HC-Pro 抑制 RNA 沉默 | 第20-24页 |
| ·抑制 RNA 沉默机制 | 第20-23页 |
| ·抑制 RNA 沉默的功能位点 | 第23-24页 |
| ·HC-Pro 参与病毒的协生作用 | 第24-30页 |
| ·协生作用具有寄主依赖性 | 第25页 |
| ·参与协生作用的病毒及受益病毒 | 第25-27页 |
| ·参与协生作用的病毒基因 | 第27-28页 |
| ·HC-Pro 参与协生的区域和位点 | 第28-29页 |
| ·协生作用带来的危害 | 第29-30页 |
| ·HC-Pro 参与病毒的致病力 | 第30-35页 |
| ·参与病毒致病过程的特点 | 第31-32页 |
| ·参与病毒致病的关键区域及氨基酸位点 | 第32-34页 |
| ·参与病毒致病的机制 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-67页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·毒源的保存 | 第37页 |
| ·供试植物 | 第37页 |
| ·菌株、质粒 | 第37页 |
| ·血清 | 第37页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第37页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-67页 |
| ·载体 pCaHC 和 pCaGFP 的构建 | 第38-44页 |
| ·pCahpGFP 质粒的获得 | 第44页 |
| ·PVX 嵌合载体 PVXHC 的构建 | 第44-46页 |
| ·质粒 DNA 的定点 PCR 突变 | 第46-49页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第49-50页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第50页 |
| ·农杆菌共浸润试验及荧光观察 | 第50-52页 |
| ·GFP、PVX CP 和 TVBMV HC-Pro 表达分析 | 第52-53页 |
| ·ELISA 检测病毒积累量 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量分析 | 第54-57页 |
| ·TVBMV HC-Pro 瞬时表达系统 GFP mRNA 积累量 | 第57-61页 |
| ·TVBMV HC-Pro 瞬时表达系统 GFP siRNA 积累量 | 第61-63页 |
| ·PVA HC-Pro 瞬时表达系统 mRNA 和 siRNA 积累量 | 第63-65页 |
| ·半定量 PCR 检测 PVX CP 及 TVBMV HC-Pro 积累量 | 第65-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-96页 |
| ·载体的构建 | 第67-68页 |
| ·载体 pCaHC 和 pCaGFP 的构建 | 第67页 |
| ·载体 pCahpGFP 的构建 | 第67-68页 |
| ·载体 PVXHC 构建 | 第68页 |
| ·HC-Pro 突变体的获得 | 第68-70页 |
| ·TVBMV HC-Pro 参与抑制 RNA 沉默的氨基酸位点 | 第70-78页 |
| ·TVBMV HC-Pro 抑制 RNA 沉默活性的瞬时表达体系 | 第70-71页 |
| ·突变体浸润本氏烟叶片荧光观察 | 第71-72页 |
| ·Western blotting 检测 GFP 表达量 | 第72-73页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 GFP 及 HC-Pro 相对表达量 | 第73-77页 |
| ·Northern 杂交检测 GFP mRNA 积累量 | 第77页 |
| ·Northern 杂交检测 GFP siRNA 积累量 | 第77-78页 |
| ·TVBMV HC-Pro 参与协生作用的关键氨基酸位点 | 第78-83页 |
| ·症状观察 | 第78-80页 |
| ·PVX CP 和 TVBMV HC-Pro 积累量分析 | 第80-82页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 PVX CP 和 TVBMV HC-Pro 的表达 | 第82-83页 |
| ·TVBMV HC-Pro 参与致病力的氨基酸位点 | 第83-88页 |
| ·突变体症状及荧光观察 | 第83-87页 |
| ·TVBMV 病毒浓度及 CP mRNA 相对积累量 | 第87-88页 |
| ·PVA HC-Pro 参与抑制 RNA 沉默的氨基酸位点 | 第88-94页 |
| ·荧光观察 | 第88-90页 |
| ·HC-Pro 三个突变体 GFP 表达量分析 | 第90-91页 |
| ·浸润区域 GFP mRNA 相对积累量 | 第91-92页 |
| ·共浸润区域 Northern 杂交分析 | 第92-94页 |
| ·PVA HC-Pro 参与协生作用的氨基酸位点 | 第94-96页 |
| 4 讨论 | 第96-102页 |
| ·类似锌指结构对 HC-Pro 功能的影响 | 第96-97页 |
| ·FRNK(X)12CDN 基序对 HC-Pro 功能的影响 | 第97-99页 |
| ·糖基化作用对 HC-Pro 功能的影响 | 第99-100页 |
| ·基因组复制和移动相关位点对 HC-Pro 其他功能的影响 | 第100页 |
| ·蚜传相关基序对 HC-Pro 其他功能的影响 | 第100-101页 |
| ·第 6 位氨基酸 F 缺失对 HC-Pro 功能的影响 | 第101-102页 |
| 5 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第117页 |
