| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 序言 | 第13-26页 |
| ·蚯蚓 | 第13页 |
| ·血栓病 | 第13-14页 |
| ·蚯蚓纤溶酶 | 第14-15页 |
| ·EFE的生化制备组分 | 第15-17页 |
| ·EFE基因的研究 | 第17-18页 |
| ·EFE基因表达 | 第18-20页 |
| ·论文背景、思路及技术路线 | 第20-26页 |
| ·本实验室前期工作基础 | 第20-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·研究所用的表达载体的特点 | 第23-24页 |
| ·克隆载体 | 第23页 |
| ·表达载体 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-26页 |
| ·技术路线一 | 第24-25页 |
| ·技术路线二 | 第25页 |
| ·技术路线三 | 第25-26页 |
| 第2章 蚯蚓纤溶酶序列多态性分析 | 第26-41页 |
| ·材料和方法 | 第26-27页 |
| ·生物信息学软件、数据库和网址 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·核酸序列信息收集和分析 | 第26页 |
| ·数据库的建立 | 第26页 |
| ·序列拼接 | 第26-27页 |
| ·核酸序列比对 | 第27页 |
| ·蛋白质序列比对 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-39页 |
| ·核酸序列信息收集和分析 | 第27-28页 |
| ·电子克隆结果与分析 | 第28-39页 |
| ·P-I-O组 | 第28-32页 |
| ·P-I-1组 | 第32-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·核酸序列多态性 | 第39-40页 |
| ·蛋白质多态性 | 第40页 |
| ·P-Ⅱ组电子克隆的问题 | 第40-41页 |
| 第3章 蚯蚓纤溶酶P-Ⅲ组分序列分析 | 第41-57页 |
| ·主要实验材料 | 第41-43页 |
| ·实验材料和试剂 | 第41页 |
| ·配制试剂 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·P-Ⅲ基因分析 | 第43页 |
| ·蚯蚓EFP-Ⅲ-2基因片断的制备 | 第43-45页 |
| ·蚯蚓总RNA的提取 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·反转录合成cDNA第一条链 | 第43-44页 |
| ·EfP-Ⅲ基因片断的扩增 | 第44-45页 |
| ·P-Ⅲ质粒文库的构建 | 第45-46页 |
| ·P-Ⅲ基因片段的回收 | 第45页 |
| ·小量碱裂解法提取质粒PUC18 | 第45页 |
| ·质粒PUC18和PCR产物的酶切 | 第45页 |
| ·P-Ⅲ基因片段的琼脂糖凝胶回收纯化 | 第45-46页 |
| ·纯化的P-Ⅲ基因片段与质粒PUC18的连接 | 第46页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第46页 |
| ·质粒转化入感受态细胞 | 第46页 |
| ·质粒文库的筛选与鉴定 | 第46-47页 |
| ·白斑选取和菌种的点种 | 第46-47页 |
| ·中间引物设计 | 第47页 |
| ·白斑的菌落PCR鉴定 | 第47页 |
| ·EfP-Ⅲ-2基因的序列测定 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-55页 |
| ·P-Ⅲ组分序列分析结果 | 第47页 |
| ·蚯蚓EfP-Ⅲ-2基因片断的制备 | 第47-50页 |
| ·蚯蚓总RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·EfP-Ⅲ基因片断的扩增 | 第49-50页 |
| ·P-Ⅲ质粒文库的构建 | 第50页 |
| ·P-Ⅲ质粒文库的筛选 | 第50-51页 |
| ·测序结果和分析 | 第51-55页 |
| ·测序结果 | 第51-53页 |
| ·EfP-Ⅲ-1、EfP-Ⅲ-2和EfP-Ⅲ-3的蛋白质分析 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·P-Ⅲ核酸序列多态性问题 | 第55-56页 |
| ·蚓种与多态性的问题 | 第56-57页 |
| 第4章 EFE基因克隆表达产物的活性分析 | 第57-68页 |
| ·主要实验材料 | 第57-58页 |
| ·实验材料和试剂 | 第57页 |
| ·配制试剂 | 第57-58页 |
| ·主要实验仪器 | 第58页 |
| ·使用的质粒 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第58-59页 |
| ·感受态细菌的转化 | 第59页 |
| ·菌落PCR检验阳性克隆 | 第59-60页 |
| ·重组EFE的诱导表达与纯化 | 第60-61页 |
| ·重组EFE的诱导表达 | 第60页 |
| ·重组EFE表达产物的纯化 | 第60页 |
| ·重组EFE纯化产物的蛋白质含量测定 | 第60页 |
| ·酪蛋白平板及纤维蛋白平板法检测表达蛋白活性 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-66页 |
| ·EFE蛋白的诱导表达 | 第61-62页 |
| ·EFE蛋白的诱导表达产物的纯化 | 第62-63页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第63页 |
| ·酪蛋白平板 | 第63-64页 |
| ·纤维蛋白平板 | 第64-66页 |
| ·底物电泳 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·P-Ⅲ组分活性的问题 | 第66-67页 |
| ·四组分克隆表达产物的活性大小问题 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |