| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-17页 |
| 第2章 利用PI3K/Akt通路重要分子筛选人肝脏cDNA文库 | 第17-43页 |
| 1 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第20-21页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第21页 |
| ·cDNA文库 | 第21页 |
| ·培养基及常用试剂的配置 | 第21-22页 |
| ·分子克隆技术 | 第22页 |
| ·RT-PCR | 第22页 |
| ·人肝脏cDNA文库质量控制及扩增 | 第22页 |
| ·Y2H筛选 | 第22-28页 |
| 2. 结果 | 第28-40页 |
| ·文库鉴定及其扩增 | 第28-30页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第30页 |
| ·诱饵自激活检测 | 第30-32页 |
| ·Y2H筛库 | 第32-39页 |
| ·相互作用的初步分析 | 第39-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-43页 |
| 第3章 相互作用数据的评价和挖掘 | 第43-68页 |
| 1. 材料和方法 | 第43-45页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·酵母回转验证 | 第43-44页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第44页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第44-45页 |
| ·相互作用网络的构建 | 第45页 |
| ·相互作用数据的挖掘 | 第45页 |
| 2. 结果 | 第45-64页 |
| ·酵母回转验证 | 第45-47页 |
| ·免疫共沉淀验证 | 第47-49页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第49-54页 |
| ·相互作用数据可信度总体评价 | 第54-58页 |
| ·相互作用网络的构建 | 第58-62页 |
| ·相互作用数据的挖掘 | 第62-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-68页 |
| 第4章 泛素连接酶SIAH1对脚手架蛋白TRB3的泛素化修饰和降解的研究 | 第68-81页 |
| 1. 材料和方法 | 第73-74页 |
| ·质粒和试剂 | 第73页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第73页 |
| ·酵母回转验证 | 第73页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第73页 |
| ·MG132和CHX处理细胞 | 第73页 |
| ·共转染实验 | 第73-74页 |
| ·RNAi实验 | 第74页 |
| ·体内泛素化实验 | 第74页 |
| ·胰岛素刺激诱导Akt磷酸化 | 第74页 |
| 2. 结果 | 第74-78页 |
| ·X-gal分析确证TRB3与SIAH1在酵母细胞中存在相互作用 | 第74页 |
| ·过表达情况下TRB3与SIAH1在体内可以相互作用 | 第74-75页 |
| ·TRB3蛋白水平受泛素-蛋白酶体途径调控 | 第75页 |
| ·SIAH1通过蛋白酶体途径对TRB3蛋白水平进行下调 | 第75-76页 |
| ·SIAH1可以加快TRB3的降解速率 | 第76-77页 |
| ·SIAH1可以促进TRB3的体内泛素化 | 第77页 |
| ·SIAH1对TRB3的降解可以部分解除TRB3对Akt磷酸化水平的抑制 | 第77-78页 |
| 3. 讨论 | 第78-81页 |
| 总结和展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 附录 | 第90-104页 |
| 附录A 综述 | 第90-96页 |
| 附录B 诱饵基因引物和酵母菌落PCR鉴定引物 | 第96-98页 |
| 附录C 基因敲除表型 | 第98-104页 |
| 在读期间发表或投稿的论文、参与申请的基金 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
