| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-35页 |
| 1. HEV 概况 | 第13-15页 |
| 2. HEV 基因组 | 第15-19页 |
| ·ORF1 | 第15-16页 |
| ·ORF2 | 第16-18页 |
| ·ORF3 | 第18页 |
| ·本实验室有关HEV ORF2 的研究成果 | 第18-19页 |
| 3. 病毒入胞 | 第19-24页 |
| ·病毒受体与病毒辅助受体 | 第20-21页 |
| ·病毒内化及穿膜 | 第21-23页 |
| ·病毒诱导的信号转导 | 第23-24页 |
| 4. HEV 感染模型及其感染机制的研究 | 第24-26页 |
| ·动物模型及体外培养 | 第24-25页 |
| ·HEV 感染机制的研究 | 第25-26页 |
| 5. 筛选相互作用蛋白的研究方法 | 第26-29页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第26-27页 |
| ·免疫共沉淀 | 第27-28页 |
| ·蛋白质亲合层析 | 第28-29页 |
| 6. Grp78 蛋白的生物学功能及其已知的与病毒之间的关系 | 第29-34页 |
| ·Grp78 参与蛋白折叠组装及质量控制 | 第29-31页 |
| ·Grp78 参与内质网压力调节 | 第31-32页 |
| ·Grp78 作为分子伴侣与病毒的关系 | 第32-33页 |
| ·Grp78 作为病毒受体及其与病毒的关系 | 第33-34页 |
| 7. 本研究的目的、思路与意义 | 第34-35页 |
| 材料与方法 | 第35-59页 |
| 1. 材料 | 第35-44页 |
| ·主要仪器 | 第35-37页 |
| ·主要试剂与材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基及其常用溶液配制 | 第38-44页 |
| 2. 方法 | 第44-59页 |
| ·基因克隆 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·蛋白质的透析复性 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的性质分析方法 | 第48-49页 |
| ·常规细胞生物学实验方法 | 第49-52页 |
| ·蛋白与细胞的吸附检测法 | 第52-53页 |
| ·亲合层析操作方法 | 第53-54页 |
| ·二维电泳操作步骤 | 第54-55页 |
| ·基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 | 第55-56页 |
| ·HepG2 细胞中蛋白基因的调取 | 第56-57页 |
| ·免疫共沉淀 | 第57-59页 |
| 结果与分析 | 第59-95页 |
| 第一部分：筛选相互作用蛋白平台的建立及其相互作用的初步验证 | 第59-78页 |
| 1. p239能较好模拟HEV表面结构 | 第59-63页 |
| ·p239特异性进入细胞 | 第59-62页 |
| ·p239阻断野生1型HEV新疆株对HepG2细胞以及人原代肝细胞的感染 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63页 |
| 2. 配体/诱饵蛋白p239-CBP的相关研究 | 第63-68页 |
| ·p239-CBP 表达载体的构建及融合蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| ·p239-CBP 的评价 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第68页 |
| 3. HepG2细胞、猴肝组织中与p239相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第68-73页 |
| ·蛋白亲合层析 | 第68页 |
| ·二维电泳 | 第68-69页 |
| ·MALDI-TOF-MS 蛋白鉴定 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 4. 部分候选蛋白与p239 相互作用的验证 | 第73-78页 |
| ·HSP90、α-tubulin 与p239 相互作用的验证 | 第73-75页 |
| ·Grp78 与p239 相互作用的验证 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 第二部分：Grp78参与并介导p239对宿主细胞吸附过程的验证 | 第78-95页 |
| 5. Grp78、Grp78-his 蛋白的原核表达及纯化 | 第78-80页 |
| ·Grp78、Grp78-his 蛋白的原核表达及纯化 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第80页 |
| 6. 抗Grp78 鼠单克隆抗体的制备 | 第80-85页 |
| ·小鼠免疫 | 第80页 |
| ·融合筛选及克隆化 | 第80-81页 |
| ·腹水制备及纯化 | 第81页 |
| ·抗体鉴定 | 第81-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 7. Grp78 与p239 直接相互作用，且被ATP 解离 | 第85-87页 |
| ·Grp78 与p239 直接相互作用 | 第85-86页 |
| ·ATP 解离Grp78p、239 之间的相互作用 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87页 |
| 8. p239 通过构象位点与Grp78 结合 | 第87-90页 |
| ·p239 通过构象位点与Grp78 结合 | 第87-89页 |
| ·p239与Grp78结合的构象位点与中和位点8C11存在部分重叠 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90页 |
| 9. Grp78参与p239对宿主细胞HepG2的吸附 | 第90-95页 |
| ·流式细胞仪检测HepG2 细胞表面的Grp78 | 第90-91页 |
| ·Grp78 与p239 在细胞膜上共定位 | 第91-92页 |
| ·Grp78多抗血清阻断p239吸附HepG2细胞 | 第92-93页 |
| ·Grp78、Grp78-his 蛋白阻断p239 吸附HepG2 细胞 | 第93-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 讨论 | 第95-103页 |
| 1. p239模拟HEV表面结构 | 第95-96页 |
| 2. 筛选相互作用蛋白方案 | 第96-97页 |
| 3. 候选蛋白分离与鉴定 | 第97-100页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第98-99页 |
| ·基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 | 第99-100页 |
| 4. Grp78 与 p239 的相互关系 | 第100-103页 |
| 小结与展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附录 | 第117页 |
